Федеральная служба по надзору в сфере защиты прав потребителей
и благополучия человека

4.1. МЕТОДЫ КОНТРОЛЯ. ХИМИЧЕСКИЕ ФАКТОРЫ

Определение остаточных
количеств химических веществ
в объектах окружающей среды, атмосферном
воздухе, воздухе рабочей зоны
и сельскохозяйственной продукции

Сборник методических указаний
МУК 4.1.1960, 4.1.1961, 4.1.1963 - 4.1.1980-05

1. Разработаны Московской сельскохозяйственной академией им. К.А. Тимирязева, Учебно-научным консультационным центром «Токсикология пестицидов и агрохимикатов» (Калинин В.А., Калинина Т.С., Рыбакова О.И., Калинин А.В.).

2. Рекомендованы к утверждению Комиссией по санитарно-гигиеническому нормированию Минздрава России (протокол № 1 от 31 марта 2005 г.).

3. Утверждены Главным государственным санитарным врачом Российской Федерации, руководителем Федеральной службы по надзору в сфере защиты прав потребителей и благополучия человека Главным государственным санитарным врачом Российской Федерации Г.Г. Онищенко 21 апреля 2005 г.

4. Введены в действие с 1 июля 2005 г.

5. Введены впервые.

СОДЕРЖАНИЕ

 

4.1. МЕТОДЫ КОНТРОЛЯ. ХИМИЧЕСКИЕ ФАКТОРЫ

Измерение концентраций протиоконазола
в воздухе рабочей зоны методом высокоэффективной
жидкостной хроматографии

Настоящие методические указания устанавливают метод высокоэффективной жидкостной хроматографии для определения в воздухе рабочей зоны массовой концентрации протиоконазола в диапазоне 0,05 - 1,0 мг/м³.

2-[(RS)-2-гидрокси-2-(1-хлорциклопропил)-3-(2-хлорфенил)пропил]-2Н-1,2,4-триазол-3(4Н)-тион(IUPAC).

Структурная формула:

Эмпирическая формула: C₁₄H₁₅Cl₂N₃OS.

Молекулярная масса: 344,3.

Белое или светло-бежевое твердое вещество без запаха. Температура плавления: 139,1 - 144,5 °С. Давление паров при 20 °С: << 4×10^-7 Па. Коэффициент распределения н-октанол/вода: K_ow logP = 4,16 (рН 4), 3,82 (рН 7) и 2,0 (рН 9). Растворимость (г/ дм³) при 20 °С: ацетон - более 250, этилацетат - более 250, дихлорметан - 88, ацетонитрил - 69; растворимость в воде - 0,005 (рН 4), 0,3 (рН 8) и 2,0 (рН 9).

Вещество стабильно при хранении на воздухе, а также в кислой (DT₅₀ = 120 дней) и щелочной (DT₅₀ > 1 года) средах. В присутствии света в водных фотолитических условиях протиоконазол достаточно быстро деградирует с периодом полураспада 47,7 часа.

Агрегатное состояние в воздухе рабочей зоны - аэрозоль.

Краткая токсикологическая характеристика

Острая пероральная токсичность (LD₅₀) для крыс - более 6200 мг/кг; острая дермальная токсичность (LD₅₀) для крыс - более 2000 мг/кг; острая ингаляционная токсичность (LC₅₀) для крыс - более 4990 мг/м³ воздуха.

Протиоконазол не оказывает раздражающего действия на кожу и слизистую оболочку глаз.

Гигиенические нормативы

ОБУВ в воздухе рабочей зоны 1,0 мг/м³.

Область применения препарата

Протиоконазол - фунгицид системного действия из группы ингибиторов синтеза эргостерина. Вещество обладает защитным, искореняющим и лечебным действием.

1. Погрешность измерений

Методика обеспечивает выполнение измерений с погрешностью (δ), не превышающей ±25 %, при доверительной вероятности 0,95.

2. Метод измерения

Измерения концентраций протиоконазола выполняют методом высокоэффективной жидкостной хроматографии (ВЭЖХ) на обращенной фазе с ультрафиолетовым детектором.

Концентрирование протиоконазола из воздуха осуществляют на бумажные фильтры «синяя лента», экстракцию с фильтра проводят ацетонитрилом.

Нижний предел измерения в анализируемом объеме пробы - 1 нг.

Определению не мешают тебуконазол, основной метаболит протиоконазола - протиоконазол-дестио и компоненты препаративной формы.

3. Средства измерений, вспомогательные устройства, реактивы и материалы

3.1. Средства измерений

3.2. Реактивы

3.3. Вспомогательные устройства, материалы

 

4. Требования безопасности

4.1. При выполнении измерений необходимо соблюдать требования техники безопасности при работе с химическими реактивами по ГОСТ 12.1.007, требования электробезопасности при работе с электроустановками по ГОСТ 12.1.019, а также требования, изложенные в технической документации на жидкостный хроматограф.

4.2. Помещение должно соответствовать требованиям пожаробезопасности по ГОСТ 12.1.004 и иметь средства пожаротушения по ГОСТ 12.4.009. Содержание вредных веществ в воздухе не должно превышать норм, установленных ГН 2.2.5.1313-03 «Предельно допустимые концентрации (ПДК) вредных веществ в воздухе рабочей зоны». Организация обучения работников безопасности труда по ГОСТ 12.0.004.

5. Требования к квалификации операторов

К выполнению измерений допускают специалистов, имеющих квалификацию не ниже лаборанта-исследователя, с опытом работы на жидкостном хроматографе.

6. Условия измерений

При выполнении измерений соблюдают следующие условия:

- процессы приготовления растворов и подготовки проб к анализу проводят при температуре воздуха (20 ± 5) °С и относительной влажности не более 80 %.

- выполнение измерений на жидкостном хроматографе проводят в условиях, рекомендованных технической документацией к прибору.

7. Подготовка к выполнению измерений

Перед выполнением измерений проводят очистку ацетонитрила (при необходимости), подготовку подвижной фазы для ВЭЖХ, приготовление растворов, кондиционирование хроматографической колонки, установление градуировочной характеристики, отбор проб.

7.1. Очистка ацетонитрила

Ацетонитрил кипятят с обратным холодильником над пентоксидом фосфора не менее 1 часа, после чего перегоняют, непосредственно перед употреблением ацетонитрил повторно перегоняют над прокаленным карбонатом калия.

7.2. Приготовление 0,02 М раствора ортофосфорной кислоты

Для приготовления 0,02 М раствора ортофосфорной кислоты в мерную колбу вместимостью 1000 см³ помещают 1,36 см³ ортофосфорной кислоты, доводят водой до метки, тщательно перемешивают.

7.3. Подготовка подвижной фазы для ВЭЖХ

В мерную колбу вместимостью 1 000 см³ помещают 400 см³ 0,02 М ортофосфорной кислоты, добавляют 600 см³ ацетонитрила, перемешивают, фильтруют и дегазируют.

7.4. Кондиционирование хроматографической колонки

Промывают колонку подвижной фазой (п. 7.3) в течение 30 мин при скорости подачи растворителя 1,0 см³/мин до установления стабильной базовой линии.

7.5. Приготовление градуировочных растворов

7.5.1. Исходный раствор протиоконазола для градуировки (концентрация 500 мкг/см³). В мерную колбу вместимостью 100 см помещают 0,05 г протиоконазола доводят до метки ацетонитрилом, тщательно перемешивают. Раствор хранится в холодильнике не более 2 недель.

Растворы № 1 - 5 готовят объемным методом путем последовательного разбавления исходного раствора для градуировки.

7.5.2. Раствор № 1 протиоконазола для градуировки (концентрация 10 мкг/см³). В мерную колбу вместимостью 100 см³ помещают 2 см³ исходного раствора протиоконазола с концентрацией 500 мкг/см (п. 7.5.1), разбавляют ацетонитрилом до метки. Раствор хранится в холодильнике в течение 10 дней.

7.5.3. Рабочие растворы № 2 - 5 протиоконазола для градуировки (концентрация 0,05 - 1,0 мкг/см³) В 4 мерные колбы вместимостью 100 см³ помещают по 0,5; 1,0; 5,0 и 10,0 см³ раствора № 1 с концентрацией 10 мкг/см³ (п. 7.5.2), доводят до метки подвижной фазой (подготовленной по п. 7.3), тщательно перемешивают, получают рабочие растворы №№ 2 - 5 с концентрацией протиоконазола 0,05; 0,1; 0,5 и 1,0 мкг/см³, соответственно.

Растворы хранятся в холодильнике в течение суток.

7.6. Отбор проб

Отбор проб воздуха проводят в соответствии с требованиями ГОСТ 12.1.005-88 «ССБТ. Общие санитарно-гигиенические требования к воздуху рабочей зоны». Воздух с объемным расходом 5 дм³/мин аспирируют через бумажный фильтр «синяя лента», помещенный в фильтродержатель.

Для измерения концентрации протиоконазола на уровне 0,05 мг/м³ необходимо отобрать 50 дм воздуха. Срок хранения отобранных проб, помещенных в полиэтиленовые пакеты, в холодильной камере при 4 °С - 3 дня.

7.7. Установление градуировочной характеристики

Градуировочную характеристику, выражающую зависимость площади пика (отн. единицы) от концентрации протиоконазола в растворе (мкг/см³), устанавливают методом абсолютной калибровки по 4-м растворам для градуировки №№ 2 - 5.

В инжектор хроматографа вводят по 20 мм³ каждого градуировочного раствора и анализируют в условиях хроматографирования по п. 7.7.1. Осуществляют не менее 3-х параллельных измерений. Устанавливают площадь пика протиоконазола.

7.7.1. Условия хроматографирования

Жидкостный хроматограф с ультрафиолетовым детектором

Измерения выполняют при следующих режимных параметрах:

Колонка стальная длиной 25 см, внутренним диаметром 4,0 мм, содержащая кромасил 100 С18, зернением 8 мкм.

Температура колонки: комнатная

Подвижная фаза: 0,02 М ортофосфорная кислота-ацетонитрил (40:60, по объему)

Скорость потока элюента: 1,0 см³/мин

Рабочая длина волны: 213 нм

Чувствительность: 0,01 ед. абсорбции на шкалу

Объем вводимой пробы: 20 мм³

Ориентировочное время выхода протиоконазола: 9,6 - 9,8 мин

Линейный диапазон детектирования: 1 - 20 нг.

Образцы, дающие пики, большие, чем градуировочный раствор протиоконазола с концентрацией 1,0 мкг/см³, разбавляют подвижной фазой (подготовленной по п. 7.3).

Градуировочный график проверяют ежедневно по анализу 2 растворов для градуировки различной концентрации. Если значения площади отличаются более, чем на 9 % от данных, заложенных в градуировочную характеристику, ее строят заново, используя свежеприготовленные рабочие растворы для градуировки.

8. Выполнение измерений

Фильтр с отобранной пробой переносят в химический стакан вместимостью 100 см³, заливают 15 см³ ацетонитрила, помещают в темное место, периодически встряхивая в течение 10 минут. Растворитель сливают, отжимая фильтр стеклянной палочкой, в цилиндр с пришлифованной пробкой вместимостью 25 см³. Фильтр обрабатывают новой порцией ацетонитрила объемом 10 см³, экстракты объединяют.

Общий объем экстракта в цилиндре доводят до 25 см³ ацетонитрилом, тщательно перемешивают. Отбирают аликвоту объемом 2 см³, переносят в градуированную пробирку, добавляют 2 см подвижной фазы, приготовленной по п. 7.3, перемешивают и анализируют при условиях хроматографирования, указанных в п. 7.7.1.

Пробу вводят в инжектор хроматографа не менее двух раз. Устанавливают площадь пика, с помощью градуировочного графика определяют концентрацию протиоконазола в хроматографируемом растворе.

Перед анализом опытной пробы проводят хроматографирование холостой (контрольной) пробы - экстракта неэкспонированного фильтра.

9. Обработка результатов измерений

Массовую концентрацию протиоконазола в пробе воздуха рабочей зоны X, мг/м³, рассчитывают по формуле:

С - концентрация протиоконазола в хроматографируемом растворе, найденная по градуировочному графику в соответствии с величиной площади хроматографического пика, мкг/см³;

2 - коэффициент, учитывающий разбавление аликвоты экстракта перед хроматографированием.

W - объем экстракта, подготовленного для хроматографирования, см³;

V₂₀ - объем пробы воздуха, отобранный для анализа, приведенный к стандартным (давление 760 мм рт. ст., температура 20 °С) условиям

Т - температура воздуха при отборе пробы (на входе в аспиратор), град. С,

Р - атмосферное давление при отборе пробы, мм рт. ст.

u - расход воздуха при отборе пробы, дм³/мин,

t - длительность отбора пробы, мин.

Примечание: идентификация и расчет концентрации протиоконазола в пробах могут быть проведены с помощью программ обработки хроматографических данных с применением компьютера, включенного в аналитическую систему.

10. Оформление результатов измерений

За результат анализа () принимается среднее арифметическое результатов двух параллельных определений X₁ и X₂, ( = (X₁ + X₂)/2) расхождение между которыми не превышает значений норматива оперативного контроля сходимости (d): |X₁ - X₂| ≤ d.

d - норматив оперативного контроля сходимости, мг/м³;

d_отн. - норматив оперативного контроля сходимости, % (равен 15 %).

Результат количественного анализа представляют в виде:

- результат анализа  (мг/м³), характеристика погрешности δ, %, Р = 0,95 или

Результат измерений должен иметь тот же десятичный разряд, что и погрешность.

11. Контроль погрешности измерений

Оперативный контроль погрешности и воспроизводимости измерений осуществляется в соответствии с ГОСТ ИСО 5725-1 - 6.2002 «Точность (правильность и прецизионность) методов и результатов измерений».

12. Разработчики

Юдина Т.В., Федорова Н.Е., Волкова В.Н. (Федеральный научный центр гигиены им. Ф.Ф. Эрисмана, г. Мытищи Московской обл.); Брагина И.В. (Федеральный центр гигиены и эпидемиологии Роспотребнадзора).