4.1. МЕТОДЫ КОНТРОЛЯ. ХИМИЧЕСКИЕ ФАКТОРЫ

Фотометрическое измерение концентраций каталазы в воздухе рабочей зоны

МУК 4.1.0.374-96

Минздрав России

Москва · 1999

1. Методические указания разработаны с целью обеспечения контроля соответствия фактических концентраций вредных веществ их предельно допустимым концентрациям (ПДК) и ориентировочно безопасным уровням воздействия (ОБУВ) - санитарно-гигиеническим нормативам и являются обязательными при осуществлении санитарного контроля.

2. Методические указания по измерению концентраций вредных веществ в воздухе рабочей зоны (выпуск 32) утверждены и. о. Председателя Госкомсанэпиднадзора России - заместителем Главного государственного санитарного врача Российской Федерации 8 июня 1996 г.

3. Введены впервые.

4. Включенные в данный выпуск методики контроля разработаны и подготовлены в соответствии с требованиями ГОСТа 12.1.005-88 ССБТ «Воздух рабочей зоны. Общие санитарно-гигиенические требования», ГОСТа 12.1.016-79 ССБТ «Воздух рабочей зоны. Требования к методикам измерения концентраций вредных веществ», ГОСТа Р 1.5-92 п. 7.3, ГОСТа 8.101-90 «Государственная система обеспечения единства измерений. Методики выполнения измерений». Методические указания одобрены комиссией по государственному санитарно-эпидемиологическому нормированию Госкомсанэпиднадзора России и Проблемной комиссией «Научные основы гигиены труда и профпатологии».

Методические указания по измерению концентраций вредных веществ в воздухе рабочей зоны (выпуск 32) предназначены для центров Госсанэпиднадзора, санитарных лабораторий промышленных предприятий при осуществлении контроля за содержанием вредных веществ в воздухе рабочей зоны, а также заинтересованных министерств и ведомств.

Ответственный исполнитель: Г.А. Дьякова

Исполнители: Г.А. Дьякова, Л.Г. Макеева, Е.М. Малинина, С.М. Попова, Н.С. Горячев, М.И. Аржанова, Т.В. Рязанцева, Е.Н. Грицун.

УТВЕРЖДЕНО

И. о. Председателя Госкомсанэпиднадзора

России - заместителем Главного

государственного санитарного врача

Российской Федерации

Г.Г. Онищенко

8 июня 1996 г.

МУК 4.1.0.374-96

Дата введения: с момента утверждения

4.1. МЕТОДЫ КОНТРОЛЯ. ХИМИЧЕСКИЕ ФАКТОРЫ

Фотометрическое измерение концентраций каталазы в воздухе рабочей зоны

Ферментный препарат каталаза

(К I.II.6 - Н₂O₂ : ₂O₂ - оксидоредуктаза)                            М. м. 230000

Каталаза представляет собой темно-зеленый кристаллический порошок. Оптимальные условия проявления ферментативной активности: Т - 35 - 45 °С; рН - 6,0 - 7,0. Хорошо растворима в воде.

В воздухе находится в виде аэрозоля.

Является малоопасным веществом, обладает умеренным кумулятивным и слабым раздражающим действием.

ПДК в воздухе - 5 мг/м³.

Характеристика метода

Метод основан на реакции взаимодействия остаточных количеств пероксида водорода (после взаимодействия фермента) с молибдатом аммония и последующим фотометрическим измерением окрашенного продукта реакции при длине волны l = 415 нм. Отбор проб проводят с концентрированием на фильтр.

Нижний предел измерения в анализируемом объеме - 0,5 мкг.

Нижний предел измерения в воздухе 0,5 мг/м³ (при отборе 5 л воздуха).

Диапазон измеряемых концентраций от 0,5 до 50 мг/м³.

Измерению мешают, неорганические вещества, содержащие фосфор, а также азид, гидроксиламид, цианистый водород.

Суммарная погрешность измерения не превышает ±10 %.

Время выполнения измерения, включая отбор проб - 50 мин.

Приборы, аппаратура, посуда

Фотоэлектроколориметр, или спектрофотометр

Весы лабораторные аналитические

Фильтродержатели                                                                                 ТУ 95-72-05-77

Аспирационное устройство

Пробирки, вместимостью 15 мл с

пришлифованной пробкой                                                                   ГОСТ 10515-75

Пипетки, вместимостью 1, 2, 5 мл                                                       ГОСТ 20292-74

Колбы мерные, вместимостью 50 и 100 мл                                         ГОСТ 1770-74

Цилиндр измерительный, вместимостью 100 мл                               ГОСТ 23932-79

Бюксы                                                                                                      ГОСТ 7148-70

Секундомер                                                                                             ГОСТ 5072-79

Реактивы, растворы, материалы

Стандартный раствор каталазы. 10 мг каждого стандартного образца препарата с различной активностью растворяют в 100 мл дистиллированной воды. При отсутствии набора стандартов каталазы различной активности стандартные растворы соответствующей активности готовят из раствора фермента в 1000 единиц активности, разводя этот раствор в 200; 40; 20; 10; 5; 2,5; 2,0 раза. Для анализа берут по 0,1 мл каждого раствора, что соответствует 0,5; 2,5; 5,0; 10; 20; 40 и 50 ед. активности.

Вода дистиллированная                                                                        ГОСТ 6709-72

Водорода пероксид, 3 %-ный раствор                                                 ГОСТ 177-77

Кислота серная, 10 н раствор                                                                ГОСТ 4204-77

Молибдат аммония, 0,02 М раствор                                                     ГОСТ 3765-78

Фильтры «синяя лента»                                                                         ТУ 6-09-1678-77

Отбор проб воздуха

Воздух с объемным расходом 5 л/мин аспирируют через фильтр «синяя лента», закрепленный в фильтродержателе. Для измерения 0,5 ПДК следует отобрать не более 5 л воздуха.

Пробы могут сохраняться в течение 7 дней в холодильнике.

Подготовка к измерению

Градуировочные растворы (устойчивы 2 часа) готовят согласно таблице.

Таблица

Шкала градуировочных растворов

Для построения градуировочного графика исходные растворы смешивают и прогревают 1 мин при 37 °С, затем добавляют пероксид водорода и инкубируют 3 мин при 37 °С (рН 6,8). Реакцию останавливают внесением 1,0 мл 10 н серной кислоты, затем добавляют 1,0 мл 0,02 М раствора молибдата аммония. После каждого добавления растворы перемешивают. Через 20 мин измеряют оптическую плотность на фотоэлектроколориметре при длине волны 415 нм. Измерение оптической плотности растворов проводят в кюветах с толщиной поглощающего слоя 10 мм по отношению к раствору сравнения не содержащего каталазу. Искомую оптическую плотность градуировочных растворов находят по разности оптических плотностей раствора сравнения и анализируемого раствора.

Строят градуировочный график: на ось ординат наносят значения разности оптических плотностей градуировочных растворов, на ось абсцисс - соответствующие им концентрации препарата в мкг с известной активностью.

Проверку градуировочного графика проводят 1 раз в месяц или в случае использования новой партии реактивов.

Проведение измерения

Фильтр с отобранной пробой переносят в бюкс, заливают 5 мл дистиллированной воды и оставляют на 10 мин, периодически перемешивая. Полученный раствор прогревают при 37 °С в течение 1 мин. Затем добавляют 1 мл 3 %-ного раствора пероксида водорода и инкубируют 3 мин при 37 °С (рН 6,8). Останавливают реакцию внесением 1,0 мл 10 н серной кислоты. Затем добавляют 1,0 мл 0,02 М раствора молибдата аммония. После каждого добавления реактива следует хорошо перемешать смесь. Через 20 мин измеряют оптическую плотность полученного анализируемого раствора, по сравнению с контрольным раствором, которым является вытяжка с чистого фильтра, обработанная одновременно и аналогично пробе. Искомую оптическую плотность пробы находят по разности оптических плотностей контрольного и анализируемого растворов.

Количественное определение концентрации каталазы в анализируемой пробе проводят по предварительно построенному градуировочному графику.

Расчет концентрации

Концентрацию вещества (С) в воздухе (мг/м³) вычисляют по формуле:

а - содержание каталазы в анализируемом объеме пробы, мкг;

в - объем раствора пробы, мл;

V - объем воздуха, отобранного для анализа и приведенного к стандартным условиям, л (см. приложение 1).

Методические указания разработаны Киевским госуниверситетом, Украина.

Приложение 1

Приведение объема воздуха к стандартным условиям (температура 20 °С и давление 760 мм рт. ст.) проводят по формуле:

V_t - объем воздуха, отобранный для анализа, л;

Р - барометрическое давление, кПа (101,33 кПа = 760 мм рт. ст.);

t - температура воздуха в месте отбора пробы, °С.

Для удобства расчета V₂₀ следует пользоваться таблицей коэффициентов (приложение 2). Для приведения воздуха к стандартным условиям надо умножить V_t на соответствующий коэффициент.

Приложение 2

Коэффициенты для приведения объема воздуха к стандартным условиям

Приложение 3

Вещества, определяемые по ранее утвержденным методическим указаниям по измерению концентраций вредных веществ в воздухе рабочей зоны

Приложение 4

Рис. 1

Ловушка-концентратор. Общий вид

Рис. 2

Ловушка-концентратор