| ||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||
Государственное санитарно-эпидемиологическое нормирование 4.1. МЕТОДЫ КОНТРОЛЯ. ХИМИЧЕСКИЕ ФАКТОРЫ Измерение концентраций действующих Сборник Москва 2011 1. Разработаны Федеральным научным центром гигиены имени Ф.Ф. Эрисмана. 2. Рекомендованы к утверждению Комиссией по санитарно-эпидемиологическому нормированию при Федеральной службе по надзору в сфере защиты прав потребителей и благополучия человека (протокол от 28.12.2010 № 3). 3. Введены в действие с момента утверждения. 4. Введены впервые. СОДЕРЖАНИЕ
4.1. МЕТОДЫ КОНТРОЛЯ. ХИМИЧЕСКИЕ ФАКТОРЫ Измерение концентраций паклобутразола Методические
указания Настоящие методические указания устанавливают метод высокоэффективной жидкостной хроматографии для определения в воздухе рабочей зоны и смывах с кожных покровов операторов массовой концентрации паклобутразола в диапазонах: 0,04 - 0,4 мг/м3 и 0,5 - 5,0 мкг/смыв соответственно. Паклобутразол (2RS, 3RS)-1-(4-хлорфенил)-4,4-диметил-2-(1Н-1,2,4-триазол-1-ил)пентан-3-ол (IUPAC) C15H20ClN3O Мол. масса 293,5 Белое твердое вещество без запаха. Температура плавления (164 ± 0,5) °С. Давление паров 1,9 ∙ 10-3 мПа (при 20 °С). Плотность 1,23 г/см3 (при 20 °С). Растворимость в органических растворителях при 20 °С (в г/дм3): ацетон - 72,4; дихлорэтан - 51,9; н-гептан - 0,199; метанол - 115; ксилол - 5,67; н-октанол - 29,4; этилацетат - 45,1. Растворимость в воде при 20 °С (в мг/дм3): 12,9 (чистая вода); 17,2 (рН 5); 24,8 (рН 7); 24,1 (рН 9). Коэффициент распределения н-октанол/вода Kow logP = 3,11 (23 °С). Агрегатное состояние в воздухе рабочей зоны - аэрозоль. Краткая токсикологическая характеристика Острая пероральная токсичность (LD50) для крыс (самки) - 1330 мг/кг; острая дермальная токсичность (LD50) для кроликов > 2000 мг/кг; острая ингаляционная токсичность (LC50) для крыс > 250 мг/дм3 (4 ч). Область применения Паклобутразол - системный фунгицид широкого спектра действия, относится к классу триазола. Рекомендуемый ориентировочный безопасный уровень воздействия (ОБУВ) в воздухе рабочей зоны - 0,4 мг/м3. 1. Погрешность измеренийМетодика обеспечивает выполнение измерений с погрешностью, не превышающей ± 25 %, при доверительной вероятности 0,95. 2. Метод измеренийИзмерения концентраций паклобутразола выполняют методом высокоэффективной жидкостной хроматографии (ВЭЖХ) на обращенной фазе с ультрафиолетовым детектором. Концентрирование паклобутразола из воздуха осуществляют на бумажный фильтр «синяя лента», экстракцию с фильтров выполняют ацетоном. Смыв с кожных покровов проводят этиловым спиртом. Нижний предел измерения в анализируемом объеме пробы - 5 нг. Средняя полнота извлечения с фильтров - 93,22 %, с поверхности кожи - 83,42 %. 3. Средства измерений, вспомогательные устройства, реактивы и материалы
4. Требования безопасности4.1. При выполнении измерений необходимо соблюдать требования техники безопасности при работе с химическими реактивами по ГОСТ 12.1.007-76, требования по электробезопасности при работе с электроустановками по ГОСТ 12.1.019-79, а также требования, изложенные в технической документации на жидкостный хроматограф. 4.2. Помещение должно соответствовать требованиям пожаробезопасности по ГОСТ 12.1.004-91 и иметь средства пожаротушения по ГОСТ 12.4.009-83. Содержание вредных веществ в воздухе не должно превышать ПДК (ОБУВ), установленных ГН 2.2.5.1313-03 и ГН 2.2.5.2308-07. Организация обучения работников безопасности труда -по ГОСТ 12.0.004-90. 5. Требования к квалификации операторовК выполнению измерений допускают специалистов, имеющих квалификацию не ниже лаборанта-исследователя, с опытом работы на жидкостном хроматографе, освоивших данную методику и подтвердивших экспериментально соответствие получаемых результатов нормативам контроля погрешности измерений по п. 13. 6. Условия измеренийПри выполнении измерений соблюдают следующие условия: · процессы приготовления растворов и подготовки проб к анализу проводят при температуре воздуха (20 ± 5) °С и относительной влажности не более 80 %; · выполнение измерений на жидкостном хроматографе проводят в условиях, рекомендованных технической документацией к прибору. 7. Подготовка к выполнению измеренийВыполнению измерений предшествуют следующие операции: очистка органических растворителей (при необходимости), подготовка подвижной фазы для ВЭЖХ, кондиционирование хроматографической колонки, приготовление растворов для градуировки и внесения, установление градуировочной характеристики, подготовка фильтров «синяя лента» и салфеток для отбора проб, отбор проб. 7.1. Очистка растворителей7.1.1. Ацетон Ацетон перегоняют над небольшим количествам перманганата калия и прокаленным карбонатом калия или подвергают ректификационной перегонке на колонне с числом теоретических тарелок не менее 30. Ацетонитрил кипятят с обратным холодильником над пентоксидом фосфора (на I дм3 ацетонитрила 20 г пентоксида фосфора) не менее 1 ч, после чего перегоняют, непосредственно перед употреблением ацетонитрил повторно перегоняют над прокаленным карбонатом калия (на 1 дм3 ацетонитрила 10 г карбоната калия). 7.2. Подготовка подвижной фазы для ВЭЖХ7.2.1. Приготовление раствора ортофосфорной кислоты с массовой долей 0,2 %. (0,2 %-ый раствор). В мерную колбу вместимостью 1000 см3 помещают 500 см3 бидистиллированной или деионизованной воды, 2 см3 ортофосфорной кислоты, перемешивают, доводят до метки бидистиллированной или деионизованной водой и еще раз тщательно перемешивают. 7.2.2. Приготовление подвижной фазы. В мерную колбу вместимостью 1000 см3 помещают 450 см3 ацетонитрила и 550 см3 0,2 %-го раствора ортофосфорной кислоты, перемешивают, фильтруют и дегазируют. 7.3. Кондиционирование хроматографической колонкиПромывают колонку подвижной фазой (приготовленной по п. 7.2) при скорости подачи растворителя 1,0 см3/мин до установления стабильной базовой линии. 7.4. Приготовление градуировочных растворов и растворов внесения7.4.1. Исходный раствор паклобутразола для градуировки (концентрация 250 мкг/см3). В мерную колбу вместимостью 100 см3 помещают 0,025 г паклобутразола, растворяют в 50 - 60 см3 ацетонитрила, доводят ацетонитрилом до метки, тщательно перемешивают. Раствор хранят в морозильной камере при температуре -18 °С в течение 6 месяцев. Растворы № 1 - 5 готовят объемным методом путем последовательного разбавления исходного раствора для градуировки. 7.4.2. Раствор № 1 паклобутразола для градуировки и внесения (концентрация 25 мкг/см3). В мерную колбу вместимостью 100 см3 помещают 10 см3 исходного раствора паклобутразола с концентрацией 250 мкг/см3 (п. 7.4.1), разбавляют ацетонитрилом до метки. Градуировочный раствор № 1 хранят в холодильнике при температуре 4 - 6 °С в течение 3 месяцев. Этот раствор используют для приготовления проб с внесением при оценке полноты извлечения действующего вещества методом «внесено-найдено». 7.4.3. Рабочие растворы № 2 - 5 паклобутразола для градуировки (концентрация 0,25 - 2,5 мкг/см3). В 4 мерные колбы вместимостью 100 см3 помещают по 1, 2, 4 и 10 см3 градуировочного раствора № 1 с концентрацией 25 мкг/см3 (п. 7.4.2), доводят до метки подвижной фазой, приготовленной по п. 7.2., тщательно перемешивают, получают рабочие растворы №№ 2 - 5 с концентрацией паклобутразола 0,25; 0,5; 1,0 и 2,5 мкг/см3 соответственно. Рабочие растворы сразу после приготовления помещают в холодильник, где хранятся при температуре 4 - 6 °С не более 20 дней. 7.5. Установление градуировочной характеристикиГрадуировочную характеристику, выражающую зависимость площади пика (мБА ∙ с) от концентрации паклобутразола в растворе (мкг/см3), устанавливают методом абсолютной калибровки по 4 растворам для градуировки №№ 2 - 5. В инжектор хроматографа вводят по 20 мм3 каждого градуировочного раствора и анализируют в условиях хроматографирования по п. 7.5.1. Осуществляют не менее 5 параллельных измерений. Устанавливают площади пиков, на основании которых строят градуировочную зависимость. Градуировочную характеристику проверяют перед проведением измерения по анализу одного из градуировочных растворов. Если значение площади отличается более, чем на 11 % от данных, заложенных в градуировочную характеристику, ее строят заново, используя свежеприготовленные рабочие растворы для градуировки. 7.5.1. Условия хроматографирования Измерения выполняют при следующих режимных параметрах. Жидкостный хроматограф с ультрафиолетовым детектором с переменной длиной волны. Хроматографическая колонка стальная, длиной 150 мм, внутренним диаметром 4,6 мм, содержащая Eclipse XDB С18, зернением 5 мкм. Температура колонки: 25 °С. Подвижная фаза: ацетонитрил-0,2 %-я ортофосфорная кислота (45:55, по объему). Скорость потока элюента: 1,0 см3/мин. Рабочая длина волны: 225 нм. Объем вводимой пробы: 20 мм3. Ориентировочное время выхода паклобутразола: 8,2 - 8,3 мин. Линейный диапазон детектирования: 5 - 50 нг. 7.6. Подготовка фильтров для отбора проб воздухаДиаметр бумажного фильтра «синяя лента» должен соответствовать внутреннему диаметру фильтродержателя. Фильтры последовательно по 3 раза промывают на воронке Бюхнера этанолом, затем ацетонитрилом порциями 25 - 30 см3, сушат с помощью разряжения, создаваемого водоструйным насосом, затем на воздухе при комнатной температуре. До использования фильтры хранят в герметично закрытой стеклянной таре. 7.7. Подготовка салфеток для проведения смыва7.7.1. Приготовление раствора натрия углекислого с массовой долей 5 % Навеску (25 ± 0,1) г натрия углекислого помещают в мерную колбу вместимостью 500 см3, растворяют в деионизированной воде, доводят водой до метки, перемешивают. 7.7.2. Подготовка салфеток для проведения смыва Вырезают салфетки (лоскуты) из белой бязи размером 10×10 см, затем их последовательно обрабатывают 5 %-м раствором углекислого натрия, (при кипячении), водой до нейтральной реакции промывных вод, 2-кратно промывают этиловым спиртом, сушат на воздухе при комнатной температуре. До использования салфетки хранят в герметично закрытой стеклянной таре. 8. Отбор и хранение проб воздухаОтбор проб осуществляют в соответствии с требованиями ГОСТ 12.1.005-88 «ССБТ. Общие санитарно-гигиенические требования к воздуху рабочей зоны» и Р 2.2.2006-05 (прилож. 9, обязательное) «Общие методические требования к организации и проведению контроля содержания вредных веществ в воздухе рабочей зоны», пункт 2 «Контроль соответствия максимальным ПДК». Воздух с объемным расходом 2 - 4 дм3/мин аспирируют через бумажный фильтр «синяя лента», помещенный в фильтродержатель. Для измерения концентрации паклобутразола на уровне предела обнаружения (0,04 мг/м3) необходимо отобрать 12,5 дм3 воздуха, на уровне 0,5 ОБУВ воздуха рабочей зоны - 2,5 дм3 воздуха. Срок хранения отобранных проб, помещенных в полиэтиленовые пакеты, в холодильнике при температуре 4 - 5 °С - 20 дней. 9. Условия проведения смываСмывы проводят в конце работы или после выполнения отдельных операций с открытых и закрытых спецодеждой или другими СИЗ участков тела (лоб, лицо, шея, грудь, предплечье, голень, кисти рук, включая межпальцевые промежутки). До работы выбирают участок кожи, обрабатывают его для удаления загрязнений, фиксируют площадь (не менее 200 см2). При необходимости отбирают фоновые смывы. Смыв выполняют способом обмыва фиксированного участка кожи этиловым спиртом, помещая 20 см3 в стеклянную емкость с металлической крышкой. Тканевой салфеткой, смоченной растворителем, с помощью пинцета (индивидуально) обмывают этот участок сверху вниз. Операцию повторяют дважды. Срок хранения отобранных проб смывов, помещенных в герметично закрытые емкости, в морозильной камере при температуре -18 °С - 30 дней. 10. Выполнение измерений10.1. Воздух рабочей зоныЭкспонированный фильтр переносят в химический стакан вместимостью 150 см3, заливают 20 см3 ацетона, помещают на встряхиватель на 10 мин. Растворитель сливают, фильтр еще дважды обрабатывают новыми порциями растворителя объемом 10 см3, выдерживая на встряхивателе по 10 мин. Объединенный экстракт переносят (через воронку) в круглодонную колбу, упаривают на ротационном вакуумном испарителе при температуре бани не выше 35 °С почти досуха, оставшийся растворитель отдувают потоком теплого воздуха. Остаток растворяют в 2 см подвижной фазы (подготовленной по п. 7.2), тщательно перемешивают и анализируют при условиях хроматографирования, указанных в п. 7.5.1. 10.2. Смывы с кожных покрововПробу смыва сливают (через воронку) в колбу для упаривания, с помощью пинцета извлекают салфетку, помещают в конусную химическую воронку, установленную в муфту колбы для упаривания, тщательно отжимают и промывают этиловым спиртом дважды порциями по 10 см3, предварительно ополаскивая растворителем емкость, в которой находилась проба. Объединенный раствор упаривают в грушевидной колбе на ротационном вакуумном испарителе при температуре бани не выше 35 °С почти досуха, оставшийся растворитель отдувают потоком теплого воздуха. Остаток растворяют в 2 см3 подвижной фазы (подготовленной по п. 7.2) и анализируют при условиях хроматографирования, указанных в п. 7.5.1. Пробу вводят в испаритель хроматографа не менее двух раз. Устанавливают площадь пика действующего вещества, с помощью градуировочного графика определяют концентрацию паклобутразола в хроматографируемом растворе. Образцы, дающие пики, большие, чем градуировочный раствор с концентрацией 2,5 мкг/см3, разбавляют подвижной фазой (не более чем в 50 раз). 11. Обработка результатов анализа11.1. Воздух рабочей зоныКонцентрацию паклобутразола в пробе воздуха (X), мг/м3, рассчитывают по формуле:
С - концентрация паклобутразола в хроматографируемом растворе, найденная по градуировочному графику в соответствии с величиной площади хроматографического пика, мкг/см3; W - объем экстракта, подготовленного для хроматографирования, см3; Vt - объем пробы воздуха, отобранный для анализа, приведенный к стандартным условиям (давление 760 мм рт.ст., температура 20 °С), дм3.
T - температура воздуха при отборе проб (на входе в аспиратор), °С; Р - атмосферное давление при отборе пробы, мм рт.ст.; u - расход воздуха при отборе пробы, дм3/мин; t - длительность отбора пробы, мин; R - коэффициент, равный 0,386 для воздуха рабочей зоны. За результат анализа принимают среднее арифметическое результатов двух параллельных определений, расхождение между которыми не превышает предела повторяемости (1):
X1, X2 - результаты параллельных определений, мг/ м3; r - значение предела повторяемости (таблица), при этом r = 2,8σr. 11.2. Смывы с кожных покрововКонцентрацию паклобутразола в пробе смыва X, мкг/смыв, рассчитывают по формуле: X = C ∙ W, где С - концентрация паклобутразола в хроматографируемом растворе, найденная по градуировочному графику в соответствии с величиной площади хроматографического пика, мкг/см3; W - объем экстракта, подготовленного для хроматографирования, см3. Примечание. Идентификация и расчет концентрации вещества в пробах могут быть проведены с помощью компьютерной программы обработки хроматографических данных, включенной в аналитическую систему. 12. Оформление результатов измеренийРезультат количественного анализа представляют в виде: результат анализа
Δ - граница абсолютной погрешности, мг/м3 (мкг/смыв);
δ - граница относительной погрешности методики (показатель точности по диапазону концентраций, таблица), %. Результат измерений должен иметь тот же десятичный разряд, что и погрешность. Если содержание вещества менее нижней границы диапазона определяемых концентраций, результат анализа представляют в виде: «содержание паклобутразола в пробе воздуха рабочей зоны - менее 0,04 мг/м3; в пробе смыва - менее 0,5 мкг/смыв»*. ______________ * - 0,04 мг/м3; 0,5 мкг/смыв - пределы обнаружения при отборе 12,5 дм воздуха рабочей зоны; в пробе смыва (фиксированная площадь смыва, 200 см2) соответственно. 13. Контроль качества результатов измеренийОперативный контроль погрешности и воспроизводимости измерений осуществляется в соответствии с ГОСТ Р ИСО 5725-(1 - 6)-2002 «Точность (правильность и прецизионность) методов и результатов измерений». Таблица Значения характеристики погрешности, нормативов оперативного контроля точности, повторяемости, воспроизводимости
X - массовая концентрация анализируемого компонента в пробе, 13.1. Стабильность результатов измерений контролируют перед проведением измерений, анализируя один из градуировочных растворов. 13.2. Плановый внутрилабораторный оперативный контроль процедуры выполнения анализа проводится методом добавок. Образцами для контроля являются реальные пробы воздушной среды и смывов с кожных покровов. Объем отобранных для контроля процедуры выполнения анализа проб воздуха и смывов с кожи должен соответствовать удвоенному объему, необходимому для проведения анализа по методике, фиксированная площадь смыва должна быть увеличена в 2 раза. После отбора проб экстракт с фильтра, а также пробу смыва делят на две равные части, первую из которых анализируют в точном соответствии с прописью методики и получают результат анализа исходной рабочей пробы - X. Во вторую часть вносят добавку анализируемого компонента (величина добавки Хд должна соответствовать 50 - 150 % от содержания компонента в пробе, общая концентрация не должна превышать верхнюю границу диапазона измерения) и анализируют в точном соответствии с прописью методики, получая результат анализа рабочей пробы с добавкой - X'. Результаты анализа исходной рабочей пробы (X) и рабочей пробы с добавкой (X') получают в условиях повторяемости (один аналитик, использование одного набора мерной посуды, одной партии реактивов и т.д.). Решение об удовлетворительности процедуры анализа принимают при выполнении условия: |Х' - Х - Хд| ≤ K, где (2)
X, X' - результаты измерений исходной рабочей пробы и пробы с добавкой соответственно (мг/м3, мкг/смыв); Хд - величина добавки (мг/м3, мкг/смыв); K - норматив оперативного контроля точности (в соответствии с диапазоном концентраций, таблица), мг/м3, мкг/смыв. При невыполнении условия (2) процедуру контроля повторяют. При повторном невыполнении условия (2) выясняют причины, приводящие к неудовлетворительным результатам, и принимают меры по их устранению. 13.3. Проверка приемлемости результатов измерений, полученных в условиях воспроизводимости. Расхождение между результатами измерений, выполненных в двух разных лабораториях, не должно превышать предела воспроизводимости (R): |Х1 - Х2| ≤ R, где (3)
X1, Х2 - результаты измерений в двух разных лабораториях (мг/м3, мкг/смыв); R - предел воспроизводимости (в соответствии с диапазоном концентраций, табл.), мг/м3, мкг/смыв. Если выполняется условие (3), то воспроизводимость измерений считается удовлетворительной. При превышении норматива контроля вопроизводимости эксперимент повторяют, при повторном превышении указанного норматива выясняют причины и по возможности их устраняют. 14. РазработчикиЮдина Т.В., Федорова Н.Е., Волкова В.Н. (ФГУН «Федеральный научный центр гигиены им. Ф.Ф. Эрисмана Роспотребнадзора»). | ||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||
© 2013 Ёшкин Кот :-) |