Федеральная служба по надзору в сфере защиты прав потребителей
и благополучия человека

4.1. МЕТОДЫ КОНТРОЛЯ. ХИМИЧЕСКИЕ ФАКТОРЫ

Определение остаточных количеств
тебуконазола, триадимефона и триадименола
в ботве и корнеплодах свеклы методом
газожидкостной хроматографии

Методические указания
МУК 4.1.2458-09

1. Разработаны Всероссийским НИИ защиты растений (В.И. Долженко, И.А. Цибульская, Т.Ф. Блинова, О.К. Остроухова).

2. Рекомендованы к утверждению Комиссией по санитарно-эпидемиологическому нормированию при Федеральной службе по надзору в сфере защиты прав потребителей и благополучия человека (протокол от 25 декабря 2008 г. № 3),

3. Утверждены Руководителем Федеральной службы по надзору в сфере защиты прав потребителей и благополучия человека, Главным государственным санитарным врачом Российской Федерации Г.Г. Онищенко 2 февраля 2009 г.

4. Введены в действие с 29 апреля 2009 г.

5. Введены впервые.

4.1. МЕТОДЫ КОНТРОЛЯ. ХИМИЧЕСКИЕ ФАКТОРЫ

Определение остаточных количеств
тебуконазола, триадимефона и триадименола
в ботве и корнеплодах свеклы методом
газожидкостной хроматографии

Настоящие методические указания устанавливают метод газожидкостной хроматографии для определения в корнеплодах свеклы массовой концентрации тебуконазола, триадимефона и триадименола в диапазоне концентраций 0,01 - 0,1 мг/кг, в ботве свеклы - 0,05 - 0,5 мг/кг.

Тебуконазол

Структурная формула:

С₁₆Н₂₂ClN₃О
Мол. масса: 307,8

(RS)-1р-хлорфенил-4,4-диметил-3-(1Н-1,2,4-триазол-1-ил метил) пентан-3-ил (IUPAC).

Химически чистый препарат - бесцветное кристаллическое вещество.

Температура плавления: 105 °С

Давление паров при 20 °С - 1,7×10^-3 mРа

Коэффициент распределения н-октанол/вода: K_ow log Р = 3,7 (20 °С)

Растворимость в воде при 20 °С - 36 мг/л (pH 5 - 9); гексане < 0,1, изопропаноле, толуоле - 5 - 100, дихлорметане > 200 (в г/л при 20 °С).

Вещество стабильно на свету, при повышенной температуре и гидролизу в чистой воде.

Класс токсичности по ВОЗ - III, ЕПА - II.

Острая оральная токсичность (LD₅₀) для крыс 4000 г/кг, дермальная > 5000 мг/кг.

Область применения: системный фунгицид широкого спектра действия.

Триадимефон

Структурная формула:

C₁₄H₁₆ClN₃O₂
Мол. масса: 293,8

1-(4-хлорфенокси)-3,3-диметил-1-(1Н-1,2,4-триазол-1-ил) бутан-2-он (IUРАС).

Химически чистый препарат - бесцветное кристаллическое вещество со слабым характерным запахом.

Температура плавления: 82,3 °С.

Давление паров при 20 °С - 0,02 mРа, при 25 °С - 0,06 mРа.

Коэффициент распределения н-октанол/вода: K_ow log Р = 3,11 (20 °С)

Растворимость в воде при 20 °С - 64 мг/л (pH 5 - 9); гексане - 6,3, изопропаноле 99, дихлорметане, толуоле > 200 (в г/л при 20 °С); умеренно растворим в большинстве органических растворителей. Устойчив к гидролизу.

Класс токсичности по ВОЗ - III, ЕПА - III.

Область применения: системный фунгицид защитного действия.

Триадименол

Структурная формула:

С₁₄Н₁₈ClN₃O₂
Мол. масса: 295,8

(1RS, 2RS; 1RS, 2SR)-1-(4-хлорфенокси)-3,3-диметил-1-(1Н-1,2,4-гриазол-1-ил) бутан-2-ол (IUРАС).

Химически чистый препарат - бесцветное кристаллическое вещество без запаха.

Температура плавления: 138,2 °С

Давление паров при 20 °С - 6×10^-4 mРа.

Коэффициент распределения н-октанол/вода: K_ow log Р = 3,08 (20 °С)

Растворимость в воде при 20 °С - 62 мг/л (pH 5 - 9); гексане - 0,1 - 1,0, изопропаноле 50 - 100, толуоле 20 - 50, дихлорметане > 250 (в г/л при 20 °С). Устойчив к гидролизу. Класс токсичности по ВОЗ - III, ЕПА - III.

Область применения: системный фунгицид защитного действия.

Гигиенические нормативы для сахарной свеклы: тебуконазол - МДУ не установлен, триадимефон - 0,5 мг/кг, триадименол - МДУ не установлен.

Методика определения тебуконазола, триадимефона и
триадименола (при их совместном присутствии) в ботве
и корнеплодах сахарной свеклы методом
газожидкостной хроматографии

1. Основные положения

1.1. Принцип метода

Методика основана на извлечении тебуконазола, триадимефона и триадименола из образца ботвы или корнеплодов свеклы органическими растворителями с последующей очисткой экстракта перераспределением между двумя несмешивающимися жидкими фазами и количественном определении газохроматографическим методом с использованием насадочных колонок и термоионною детектора (ТИД) для определения тебуконазола и триадименола и электронозахватного детектора (ДЭЗ или ДПР) для определения триадимефона.

1.2. Метрологические характеристики

При соблюдении всех регламентированных условий проведения анализа в точном соответствии с данной методикой погрешность (и ее составляющие) результатов измерений при доверительной вероятности Р = 0,95 не превышает значений, приведенных в табл. 1, для соответствующих диапазонов концентраций.

Таблица 1

Метрологические параметры

1.3. Избирательность метода

Избирательность метода определения тебуконазола, триадимефона и триадименола достигается сочетанием условий подготовки проб и хроматографирования.

2. Средства измерений, реактивы, вспомогательные устройства н материалы

2.1. Реактивы и материалы

2.2. Приборы, аппаратура, посуда

3. Отбор и хранение проб

Отбор образцов свеклы для анализа проводят в соответствии с ГОСТ 1722-85 «Свекла столовая свежая, заготовляемая и поставляемая». Для длительного хранения образцы свеклы (ботва и корнеплоды) помещают в морозильную камеру с температурой - 18 °С и хранят в закрытой полиэтиленовой таре.

4. Подготовка к определению

4.1. Подготовка и очистка реактивов и растворителей. Перед началом работы рекомендуется проверить чистоту применяемых органических растворителей. Для этого 100 мл растворителя упаривают в ротационном вакуумном испарителе при температуре +40 °С до объема 1 см³ и хроматографируют. При обнаружении мешающих определению примесей очистку растворителей производят в соответствии с общепринятыми методиками.

4.2. Приготовление градуировочных растворов. Стандартные растворы готовят растворением в ацетоне (марки осч) по 50 мг аналитических стандартов тебуконазола, триадимефона и триадименола в мерных колбах на 100 см³. Из полученных растворов с концентрацией 0,5 мг/см³ готовят градуировочные растворы с концентрациями 0,5, 1,0, 2,0 и 5,0 мкг/см³ методом последовательного разбавления гексаном.

При определении полноты извлечения пестицида из образцов свеклы для внесения использовали соответствующие градуировочные растворы, приготовленные из основного раствора методом последовательного разбавления гексаном. Стандартные растворы тебуконазола и триадимефона хранятся в холодильнике в течение 6 месяцев, триадименола - в течение 1 месяца; градуировочные растворы - в течение недели.

4.3. Построение градуировочного графика. Для построения градуировочных графиков (площадь пика - концентрация тебуконазола, триадимефона и триадименола в растворе) в хроматограф вводят по 1 мм³ градуировочных растворов (не менее 3-х параллельных измерений для каждой концентрации, не менее 4-х точек по диапазону измеряемых концентраций). Затем измеряют площади пиков и строят график зависимости среднего значения площади пика от концентрации пестицида в градуировочном растворе (мкг/см³).

4.4. Подготовка приборов и средств измерения. Установка и подготовка всех приборов и средств измерения проводится в соответствии с требованиями технической документации.

5. Проведение определения

5.1. Ботва и корнеплоды свеклы. Навеску усредненных проб корнеплодов (50 г) или ботвы свеклы (10 г) измельчают, заливают смесью ацетон-дистиллированная вода (1:1 по объему) и экстрагируют тебуконазол, триафимефон и триадименол в ультразвуковой ванне в течение 15 мин.

Экстракт фильтруют через фильтр «красная лента» в колбу на 250 см³. Остаток на фильтре дважды промывают водно-ацетоновой смесью порциями по 25 см³. К объединенному экстракту добавляют 10 см³ насыщенного раствора хлористого натрия и переносят в делительную воронку на 500 см³. Пестициды экстрагируют трижды дихлорметаном порциями по 25 - 30 см³. Объединенный экстракт сушат над безводным сернокислым натрием и выпаривают на ротационном испарителе досуха при температуре не выше 40 °С.

Сухой остаток растворяют в 1 см³ гексана при определении тебуконазола и триадименола (ТИД) и в 2,5 см³ гексана при определении триадимефона (ДПР). В хроматограф вводят аликвоту 1 мм³.

При одновременном определении трех компонентов с использованием капиллярной колонки может потребоваться дополнительная очистка на колонке с силикагелем 60 (п. 2.5.2 и 2.5.3).

5.2. Подготовка колонки с силикагелем для дополнительной очистки экстракта. Силикагель не менее 5 ч прокаливают при 130 °С, охлаждают и хранят в эксикаторе. Навеску силикагеля 98,5 г помещают в круглодонную колбу и добавляют 1,5 г дистиллированной воды. Колбу плотно закрывают и интенсивно встряхивают в течение 5 мин. Затем колбу присоединяют к ротационному испарителю при атмосферном давлении и медленно вращают 2 ч. Деактивированный таким образом силикагель используют в течение 5 дней.

На дно стеклянной колонки помещают тампон из стекловаты и заполняют суспензией 1 г силикагеля в 3 см³ гексана при открытом кране, сверху вносят слой 5 - 10 мм безводного сульфата натрия и промывают колонку 5 см³ гексана. Когда уровень растворителя достигнет верхнего слоя в колонке, кран закрывают. Колонка готова к работе.

5.3. Очистка экстракта на колонке с силикагелем. Гексановый раствор аналита переносят на колонку. Открывают кран и дают пробе впитаться. Когда уровень растворителя достигнет верхнего края колонки, кран закрывают. Колбу ополаскивают 1 см³ гексана, пипеткой переносят раствор на колонку и открывают кран. Элюат отбрасывают.

Продолжают элюирование последовательно 6 см³ элюента № 1, затем 6 см³ толуола, затем порциями по 6 см³ элюентов № 2 и № 3. Элюаты собирают.

Собранный объединенный элюат выпаривают досуха на ротационном испарителе при температуре не выше 40 °С. Сухой остаток растворяют в 1 см³ гексана и 1 мм³ вводят в хроматограф.

Примечание: профиль вымывания тебуконазола, триадимефона и триадименола может изменяться при использовании силикагеля новой партии или другой марки.

5.4. Условия хроматографирования. Условия хроматографирования для тебуконазола: газовый хроматограф «Цвет 550М» с ТИД. Колонка стеклянная длиной 1 м, диаметром 3 мм, заполненная 5 % SE-30 на хроматоне N-Super (0,120 - 0,160 мм). Температура колонки 235 °С, испарителя 250 °С, детектора 380 °С. Шкала электрометра 8×10⁹. Расход газа-носителя (азот) через колонку 30 см³/мин, водорода 17,4 см³/мин, воздуха 200 см³/мин. Хроматографируемый объем 1 мм³.

Условия хроматографирования для триадименола: газовый хроматограф «Цвет 550М» с ТИД. Колонка стеклянная длиной 1 м, диаметром 3 мм, заполненная 5 % ХЕ-60 на хроматоне N-Super (0,120 - 0,160 мм). Температура колонки 210 °С, испарителя 250 °С, детектора 390 °С. Шкала электрометра 16×10⁹. Расход газа-носителя (азот) через колонку 33,5 см³/мин, водорода 17,3 см³/мии, воздуха 200 см³/мин. Хроматографируемый объем 1 мм³.

Условия хроматографирования для триадимефона: газовый хроматограф «Цвет 550М» с ДПР. Колонка стеклянная длиной 1 м, диаметром 3 мм, заполненная 5 % SE-30 на хроматоне N-Super (0,120 - 0,160 мм). Температура колонки 200 °С, испарителя 240 °С, детектора 270 °С. Шкала электрометра 32×10¹⁰. Расход газа-носителя (азот) через колонку 40 см³/мин. Хроматографируемый объем 1 мм³.

Альтернативные условия хроматографирования

Газовый хроматограф «Кристалл 2000 М» с ТИД, колонка кварцевая капиллярная длиной 30 м, диаметром 0,32 мм, неподвижная фаза НP-1, толщина слоя 0,25 мкм. Температура колонки программируется от 170 °С (10 с) до 270 °С (6 мин) со скоростью 25 °С/мин. Температура термостата детектора 380 °С, испарителя 270 °С. Расход газа-носителя 1 (азот) - 14,5 см³/мин, водорода - 14 см³/мин, воздуха - 200 см³/мин. Расход газа 2 (азот, сброс) 8 см³/мин. Расход газа 3 (азот, поддув ТИД) 28 см³/мин; расход газа 5 (водород) - 13 см³/мин, газа 6 (воздух) 200 см³/мин. Деление потока 1:4. Дозируемый объем 1 мм³.

6. Обработка результатов анализа

Содержание тебуконазола, триадимефона и триадименола в пробе рассчитывают методом внешнего стандарта по формуле:

где X - массовая концентрация тебуконазола, тридимефона или триадименола в пробе, мг/кг,

Н - высота (площадь) пика анализируемого вещества, мм (мв·с);

Н_СТ - высота (площадь) пика аналитического стандарта, мм (мв·с);

А - концентрация градуировочного раствора, мкг/см³;

V - объем экстракта, подготовленного для хроматографирования, см³;

m - масса аналитической навески, г.

При получении зашкаленных пиков анализируемый экстракт разбавляют гексаном.

7. Проверка приемлемости результатов параллельных определений

За результат анализа принимают среднее арифметическое результатов двух параллельных определений, расхождение между которыми не превышает предела повторяемости (1):

где X₁, X₂ - результаты параллельных определений, мг/кг;

r - значение предела повторяемости (табл. 1), при этом r = 2,8σ_r.

При невыполнении условия (1) выясняют причины превышения предела повторяемости, устраняют их и вновь выполняют анализ.

8. Оформление результатов

Результат анализа представляют в виде:

( ± Δ) мг/кг при вероятности Р = 0,95, где

 - среднее арифметическое результатов определений, признанных приемлемыми, мг/кг;

Δ - граница абсолютной погрешности, мг/кг;

где δ - граница относительной погрешности методики (показатель точности в соответствии с диапазоном концентраций), %.

В случае если содержание компонента менее нижней границы диапазона определяемых концентраций, результат анализа представляют в виде:

«содержание вещества в пробе «менее нижней границы определения» (например. менее 0,01 ши 0,05 мг/кг*

* - 0,01 и 0,05 мг/кг - пределы обнаружения в корнеплодах и ботве свеклы соответственно).

9. Контроль качества результатов измерений

Оперативный контроль погрешности и воспроизводимости измерений осуществляется в соответствии с ГОСТ Р ИСО 5725-1 - 6-2002 «Точность (правильность и прецизионность) методов и результатов измерений».

5.1. Стабильность результатов измерений контролируют перед проведением измерений, анализируя один из градуировочных растворов.

5.2. Плановый внутрилабораторный оперативный контроль процедуры выполнения анализа проводится с применением метода добавок.

Величина добавки С_∂ должна удовлетворять условию:

где ± (±) - характеристика погрешности (абсолютная погрешность) результатов анализа, соответствующая содержанию компонента в испытуемом образце (расчетному значению содержания компонента в образце с добавкой соответственно) мг/кг, при этом:

Δ_л = ±0,84Δ,

где Δ - граница абсолютной погрешности, мг/кг;

где δ - граница относительной погрешности методики (показатель точности в соответствии с диапазоном концентраций, таблица 1), %.

Результат контроля процедуры K_к рассчитывают по формуле:

K_к =  -  - С_∂,

где , , С_∂, - среднее арифметическое результатов параллельных определений (признанных приемлемыми по п. 4), содержания компонента в образце с добавкой, испытуемом образце и концентрация добавки, соответственно, мг/кг;

Норматив контроля K рассчитывают по формуле:

Проводят сопоставление результата контроля процедуры (K_к) с нормативом контроля (K).

Если результат контроля процедуры удовлетворяет условию:

процедуру анализа признают удовлетворительной.

При невыполнении условия (2) процедуру контроля повторяют. При повторном невыполнении условия (2) выясняют причины, приводящие к неудовлетворительным результатам, и принимают меры по их устранению.

5.3. Проверка приемлемости результатов измерений, полученных в условиях воспроизводимости:

Расхождение между результатами измерений, выполненных в двух разных лабораториях, не должно превышать предела воспроизводимости (R)

X₁, X₂ - результаты измерений в двух разных лабораториях, мг/кг;

R - предел воспроизводимости (в соответствии с диапазоном концентраций), %.

10. Требования техники безопасности

При проведении работы необходимо соблюдать требования безопасности, установленные для работ с токсичными, едкими, легковоспламеняющимися веществами (ГОСТ 12.1.005-88).

При выполнении измерений с использованием газового хроматографа и работе с электроустановками соблюдать правила электробезопасности в соответствии с ГОСТ 12.1.019-79 и инструкциями по эксплуатации приборов.

Помещение лаборатории должно соответствовать требованиям пожарной безопасности по ГОСТ 12.1.004-91.

11. Требования к квалификации оператора

Измерения в соответствии с настоящей методикой может выполнять специалист-химик, имеющий опыт работы методом газожидкостной хроматографии, ознакомленный с руководством по эксплуатации хроматографа, освоивший данную методику и подтвердивший экспериментально соответствие получаемых результатов нормативам контроля погрешности измерений по п. 5.

12. Разработчики

Долженко В.И., Цибульская И.А., Блинова Т.Ф., Остроухова О.К.

Приложение

Полнота извлечения вещества, стандартное отклонение, доверительный интервал среднего результата для полного диапазона концентраций (n = 20) приведены в таблицах.

Полнота извлечения тебуконазола, стандартное отклонение,
доверительный интервал среднего результата для n = 20, Р = 0,95

Полнота извлечения триадименола, стандартное отклонение,
доверительный интервал среднего результата для n = 20, Р = 0,95

Полнота извлечения триадимефона, стандартное отклонение,
доверительный интервал среднего результата для n = 20, Р = 0,95

СОДЕРЖАНИЕ