Федеральная служба по надзору в сфере защиты прав потребителей
и благополучия человека

4.1. МЕТОДЫ КОНТРОЛЯ. ХИМИЧЕСКИЕ ФАКТОРЫ

Определение остаточных
количеств химических веществ
в объектах окружающей среды, атмосферном
воздухе, воздухе рабочей зоны
и сельскохозяйственной продукции

Сборник методических указаний
МУК 4.1.1960, 4.1.1961, 4.1.1963 - 4.1.1980-05

1. Разработаны Московской сельскохозяйственной академией им. К.А. Тимирязева, Учебно-научным консультационным центром «Токсикология пестицидов и агрохимикатов» (Калинин В.А., Калинина Т.С., Рыбакова О.И., Калинин А.В.).

2. Рекомендованы к утверждению Комиссией по санитарно-гигиеническому нормированию Минздрава России (протокол № 1 от 31 марта 2005 г.).

3. Утверждены Главным государственным санитарным врачом Российской Федерации, руководителем Федеральной службы по надзору в сфере защиты прав потребителей и благополучия человека Главным государственным санитарным врачом Российской Федерации Г.Г. Онищенко 21 апреля 2005 г.

4. Введены в действие с 1 июля 2005 г.

5. Введены впервые.

Содержание

 

4.1. МЕТОДЫ КОНТРОЛЯ. ХИМИЧЕСКИЕ ФАКТОРЫ

Определение остаточных количеств
крезоксим-метила в огурцах, томатах, ягодах
и соке винограда методом газожидкостной
хроматографии

1. Вводная часть

Действующее вещество: крезоксим-метил (BAS 490 F).

(Е)-метил-2-метоксиимино-2-/2-(о-толилокси-метил)фенил/ацетат (ИЮПАК).

Эмпирическая формула: C₁₈H₁₉NO₄.

Молекулярная масса: 313,4.

Белое кристаллическое вещество со слабым запахом.

Температура плавления: 97,2 - 101,7 °С.

Давление паров при 20 °С: 2,3×10^-3 мПа.

Растворимость (г/л) при 20 °С: вода - 0,002, гептан - 1,7, толуол - 111, дихлорметан - 939, метанол - 14,9, ацетон - 217, этилацетат - 123.

Стабильность к гидролизу при 20 °С: DT₅₀ = 34 дня (рН 7), 7 часов (рН 9).

В биологически активных почвах в аэробных условиях крезоксим-метил быстро разрушается: DT₉₀ = менее 3 дней.

Краткая токсикологическая характеристика:

Острая пероральная токсичность (LD₅₀) для крыс - более 5000 мг/кг; острая дермальная токсичность (LD₅₀) для крыс - более 2000 мг/кг. Крезоксим-метил не оказывает раздражающего действия на кожу и слизистую оболочку глаз кролика, не обладает мутагенными и сенсибилизирующими свойствами.

Крезоксим-метил нетоксичен для пчел, дождевых червей, полезных насекомых и птиц.

Гигиенические нормативы: ВМДУ, огурцах, томатах и винограде - 0,5 мг/кг.

Область применения препарата

Крезоксим-метил - синтетический фунгицид из класса стробилуринов, являющихся продуцентами гриба Strobilurus tenacellus. Вещество эффективно против широкого круга грибных патогенов хлебных злаков, овощных, кормовых, технических и плодовых культур. Обладает защитным, лечебным и искореняющим действием.

2. Методика определения остаточных количеств крезоксим-метила в огурцах, томатах, ягодах и соке винограда методом газожидкостной хроматографии

2.1. Основные положения

2.1.1. Принцип метода

Метод основан на газохроматографическом определении крезоксим-метила на неподвижной фазе OV-17 с использованием электронозахватного детектора (ЭЗД) после экстракции препарата из сока гексаном, из растительного материала водным ацетоном, предварительной очистки экстрактов перераспределением в системе несмешивающихся растворителей и окончательной очистки экстрактов на колонке с силикагелем.

Количественное определение проводится методом абсолютной калибровки.

2.1.2. Избирательность метода

В предлагаемых условиях метод специфичен в присутствии пестицидов, применяемых при возделывании огурцов, томатов и винограда.

2.1.3. Метрологическая характеристика метода

Таблица

Метрологические параметры метода

2.2. Реактивы, растворы и материалы

2.3 Приборы, аппаратура, посуда

2.4. Отбор проб

Отбор проб производится в соответствии с «Унифицированными правилами отбора проб сельскохозяйственной продукции, продуктов питания и объектов окружающей среды для определения микроколичеств пестицидов» (от 21.08.79 № 2051-79). Отобранные пробы огурцов, томатов и винограда хранят в стеклянной или полиэтиленовой таре в холодильнике не более двух дней; при длительном хранении (не более трех месяцев) пробы замораживают и хранят в морозильной камере при температуре -18 °С. Перед анализом ягоды и плоды измельчают.

2.5. Подготовка к определению

2.5.1. Подготовка и очистка реактивов и растворителей

Органические растворители перед началом работы очищают, сушат и перегоняют в соответствии с типовыми методиками. Гексан и хлористый метилен встряхивают с небольшими порциями концентрированной серной кислоты до тех пор, пока свежая порция кислоты не перестанет окрашиваться. Затем растворители последовательно промывают водой, 2,5 %-ным раствором гидроксида натрия и снова водой, после чего сушат над гидроксидом натрия и перегоняют.

Ацетон перегоняют над перманганатом калия и поташом (на 1 л ацетона 10 г KMnO₄ и 2 г K₂CO₃).

Этилацетат промывают равным объемом 5 %-го раствора двууглекислого натрия, сушат над хлористым кальцием и перегоняют.

Силикагель I степени активности встряхивают с двойным объемом очищенного ацетона и затем фильтруют на воронке Бюхнера через бумажный фильтр. Силикагель на фильтре промывают 1,5 объемом ацетона и затем высушивают при температуре 130 °С в течение 3 ч.

2.5.2. Подготовка и кондиционирование колонки

Готовую насадку (3 % OV-17 на Хромосорбе W/HP) засыпают в стеклянную колонку, уплотняют под вакуумом, колонку устанавливают в термостат хроматографа, не подсоединяя к детектору, и стабилизируют в токе азота при температуре 270 °С в течение 8 - 10 ч.

2.5.3. Приготовление стандартных растворов

Основной стандартный раствор крезоксим-метила с содержанием 100 мкг/мл готовят растворением 0,010 г препарата, содержащего 99,9 % д.в., в этилацетате в мерной колбе на 100 мл. Раствор хранят в холодильнике не более месяца.

Рабочие растворы с концентрациями 0,1; 0,2; 0,5 и 1,0 мкг/мл готовят из основного стандартного раствора крезоксим-метила соответствующим последовательным разбавлением этилацетатом. Рабочие растворы хранят в холодильнике не более трех дней.

При изучении полноты открывания крезоксим-метила в модельных матрицах используются ацетоновые растворы вещества.

2.5.4. Построение калибровочного графика

Для построения калибровочного графика в инжектор хроматографа вводят по 2 мкл рабочего стандартного раствора крезоксим-метила с концентрацией 0,1; 0,2; 0,5 и 1,0 мкг/мл. Осуществляют не менее 5 параллельных измерений и находят среднее значение площади хроматографического пика для каждой концентрации. Строят калибровочный график зависимости площади хроматографического пика в мВ×с от концентрации крезоксим-метила в растворе в мкг/мл.

2.5.5. Подготовка колонки с силикагелем для очистки экстракта

В нижнюю часть стеклянной колонки длиной 25 см и внутренним диаметром 1,2 см вставляют тампон из стекловаты, закрывают кран и вносят суспензию 5 г силикагеля в 10 мл гексана. Дают растворителю стечь до верхнего края сорбента и помещают на него слой безводного сульфата натрия высотой 1 см. Колонку последовательно промывают 25 мл смеси гексан-этилацетат (9:1, по объему) и 20 мл гексана со скоростью 1 - 2 капли в секунду, после чего она готова к работе.

2.5.6. Проверка хроматографического поведения крезоксим-метила на колонке с силикагелем

В круглодонную колбу емкостью 10 мл отбирают 1 мл стандартного раствора крезоксим-метила с концентрацией 1 мкг/мл. Отдувают растворитель током теплого воздуха, остаток растворяют в 3 мл смеси гексан-этилацетат (95:5, по объему) и наносят на колонку. Промывают колонку 40 мл смеси гексан-этилацетат (9:1, по объему) и затем 50 мл смеси гексан-этилацетат (8:2, по объему) со скоростью 1 - 2 капли в секунду. Отбирают фракции по 10 мл каждая, упаривают досуха, остаток растворяют в 2 мл этилацетата и анализируют на содержание крезоксим-метила по п. 2.7.1.

Фракции, содержащие крезоксим-метил, объединяют, упаривают досуха, остаток растворяют в 4 мл этилацетата и вновь анализируют по п. 2.7.1. Рассчитывают содержание крезоксим-метила в элюате, определяют полноту вымывания вещества из колонки и необходимый для очистки экстракта объем элюента.

Примечание: профиль вымывания крезоксим-метила может меняться при использовании новой партии сорбента и растворителей.

2.6. Описание определения

2.6.1. Экстракция крезоксим-метила и очистка экстракта

2.6.1.1. Огурцы, томаты, виноград. К навеске (25 г) измельченного материала добавляют 100 мл смеси ацетон-вода (2:1, по объему), гомогенизируют 3 минуты при 10000 об/мин. Добавляют 2 г целита и фильтруют под вакуумом на воронке Бюхнера через бумажный фильтр в колбу емкостью 250 мл. Осадок на фильтре промывают 50 мл смеси ацетон-вода (2:1, по объему). Из объединенного экстракта отбирают аликвоту раствора (около 30 мл), эквивалентную 5 г растительного материала, и упаривают ее до водной фазы на роторном вакуумном испарителе при температуре 40 °С. Водный остаток переносят в делительную воронку емкостью 100 мл, приливают 10 мл насыщенного раствора хлорида натрия и 20 мл гексана. Смесь встряхивают в течение 1 мин и после ее расслоения отделяют гексановый слой, который пропускают через стеклянный фильтр, заполненный безводным сульфатом натрия, в грушевидную колбу вместимостью 100 мл. Экстракцию водной фракции гексаном повторяют еще два раза (по 20 мл). Объединенный гексановый экстракт, содержащий крезоксим-метил, выпаривают на роторном испарителе досуха при температуре 30 °С. Дальнейшую очистку экстракта проводят по п. 2.6.3.

2.6.1.2. Виноградный сок. К 10 мл свежевыжатого сока добавляют 20 мл насыщенного раствора хлорида натрия и содержимое переносят в делительную воронку емкостью 100 мл. В воронку добавляют 20 мл гексана и смесь встряхивают в течение 1 мин. После разделения слоев собирают органическую фракцию, а водную фазу обрабатывают гексаном еще два раза (по 20 мл). Объединенный гексановый экстракт пропускают через слой безводного сульфата натрия и упаривают досуха на роторном испарителе при температуре 30 °С. Дальнейшую очистку экстракта проводят по п. 2.6.3.

2.6.3. Очистка на колонке с силикагелем

Остаток в колбе, полученный при упаривании экстрактов растительного материала (из п. 2.6.1.1 и 2.6.1.2), количественно переносят тремя 1-мл порциями смеси гексан-этилацетат (95:5, по объему) в подготовленную хроматографическую колонку (п. 2.5.5). Промывают колонку 30 мл смеси гексан-этилацетат (9:1), которые отбрасывают. Крезоксим-метил элюируют 35 мл смеси гексан-этилацетат (8:2), собирая элюат в грушевидную колбу емкостью 100 мл. Раствор упаривают досуха на роторном испарителе при температуре 30 °С. Сухой остаток экстракта сока растворяют в 10 мл, а экстрактов огурцов, томатов и винограда в 5 мл этилацетата и анализируют на содержание крезоксим-метила по п. 2.7.1.

2.7. Условия хроматографирования

2.7.1. Метод ГЖХ с насадочными колонками

Хроматограф газовый «Кристалл - 2000 М» с электронозахватным детектором (Ni⁶³) с пределом детектирования по линдану не выше 3,18×10^-14 г/см³.

Колонка хроматографическая, набивная, стеклянная, 1500×3 мм; неподвижная фаза - 3 % OV-17 на Хромосорбе W/HP (0,12 - 0,15 мм).

Температура детектора 300 °С, инжектора 270 °С, термостата колонки 240 °С.

Скорость потока газа-носителя (азота) - 30 мл/мин; поддув - 25 мл/мин.

Объем вводимой пробы - 2 мкл.

Время удерживания крезоксим-метила - 3 мин 10 с.

Предел детектирования - 0,1 нг.

Линейный диапазон детектирования - 0,1 - 1,0 нг.

Альтернативная неподвижная фаза: 5 % SE-30 на Инертоне N-AW DMCS (0,16 - 0,20 мм); колонка стеклянная 2000×2 мм; условия хроматографирования те же.

Каждую анализируемую пробу вводят в хроматограф 3 раза и вычисляют среднюю площадь хроматографического пика крезоксим-метила.

Образцы, дающие пики большие, чем стандартный раствор с концентрацией 1,0 мкг/мл, разбавляют этилацетатом.

2.7.2. Метод ГЖХ с капиллярными колонками

Хроматограф газовый «Кристалл 2000 М» с электронозахватным детектором.

Колонка капиллярная кварцевая ZB-1, 30 м×0,32 мм×0,5 мкм (SE-30).

Температура термостата испарителя - 250 °С, детектора - 300 °С, термостата колонки в программном режиме: 120 °С - 1 мин; 20°/мин до 250 °С; выдержка - 5 мин.

Газовый режим: газ-носитель - азот, общий расход - 33 мл/мин; газ для поддува в детектор - азот, расход - 30 мл/мин.

Деление потока: 1:5.

Абсолютное время удерживания крезоксим-метила: 9 мин 34 с.

Объем вводимой пробы - 2 мкл.

Линейный диапазон детектирования: 0,02 - 0,5 нг.

Каждую анализируемую пробу вводят 3 раза и вычисляют среднюю площадь хроматографического пика крезоксим-метила.

Образцы, дающие пики большие, чем стандартный раствор с концентрацией 0,2 мкг/мл, разбавляют этилацетатом.

2.8. Обработка результатов анализа

Содержание крезоксим-метила рассчитывают методом абсолютной калибровки по формуле:

Х - содержание крезоксим-метила в пробе, мг/кг или мг/дм³;

H₁ - площадь пика образца, мВ×с;

H₀ - площадь пика стандарта, мВ×с;

А - концентрация стандартного раствора крезоксим-метила, мкг/мл;

V - объем экстракта, подготовленного для хроматографирования, мл;

m - объем (мл) или масса (г) анализируемой части образца (для сока 10 мл; для плодов и ягод - 5 г).

3. Требования техники безопасности

Необходимо соблюдать общепринятые правила безопасности при работе с органическими растворителями, токсичными веществами, электронагревательными приборами и сжатыми газами.

4. Контроль погрешности измерений

Оперативный контроль погрешности и воспроизводимости измерений осуществляется в соответствии с рекомендациями МИ 2335-95. ГСИ. Внутренний контроль качества результатов количественного химического анализа.

5. Разработчики

Дубовая Л.В., Талалакина Т.Н., Макеев А.М.

ВНИИ фитопатологии, 143050, Московская обл., п/о Большие Вяземы, тел. 592-92-20.