УТВЕРЖДАЮ

Главный государственный санитарный

врач Российской Федерации,

Первый заместитель Министра

здравоохранения Российской Федерации

Г.Г. Онищенко

29 июня 2003 г.

Дата введения: с момента утверждения

 

4.1. МЕТОДЫ КОНТРОЛЯ. ХИМИЧЕСКИЕ ФАКТОРЫ

Измерение массовых концентраций (+ -)-2,3-дигидро-3-
метил-9-фтор-10-(4-метилпиперазин-1-ил)-7-оксо-7Н-
пиридо[1,2,3-dе]-1,4-бензоксазин-6-карбоновой кислоты
(офлоксацина) в воздухе рабочей зоны методом
высокоэффективной жидкостной хроматографии

Методические указания

 

МУК 4.1.1626-03

 

 

 

1. Область применения

Настоящие методические указания устанавливают количественный хроматографический анализ воздуха рабочей зоны на содержание (+-)-2,3-дигидро-3-метил-9-фтор-10-(4-метилпиперазин-1-ил)-7-оксо-7Н-пиридо[1,2,3-de]-1,4-бензоксазин-6-карбоновой кислоты (офлоксацина) в диапазоне концентраций от 0,25 до 5,00 мг/м³.

2. Характеристика вещества

2.1. Структурная формула

2.2. Эмпирическая формула C₁₈H₂₀FN₃O₄.

2.3. Молекулярная масса 361,4.

2.4. Регистрационный номер CAS 82419-36-1.

2.5. Физико-химические свойства.

Офлоксацин - антибактериальный препарат широкого спектра действия, кристаллический порошок слегка желтоватого цвета, Т_пл. 260 - 280 °С, малорастворим в воде и в этиловом спирте, растворим в органических растворителях, растворим в смеси ацетонитрила и воды (элюенте).

Агрегатное состояние в воздухе - аэрозоль.

2.6. Токсикологическая характеристика.

Офлоксацин обладает антимикробным действием, вызывает нарушение микрофлоры, обладает фотосенсибилизирующим действием.

Предельно допустимая концентрация (ПДК) в воздухе рабочей зоны 0,5 мг/м³. Класс опасности - второй.

3. Погрешность измерений

Методика обеспечивает выполнение измерений массовых концентраций офлоксацина с погрешностью не более ± 16 % при доверительной вероятности 0,95.

4. Метод измерений

Измерения массовых концентраций офлоксацина основаны на использовании высокоэффективной жидкостной хроматографии с применением спектрофотометрического детектора при длине волны 286 нм.

Отбор проб проводится с концентрированием на фильтр.

Нижний предел измерения содержания офлоксацина в хроматографируемом объеме раствора 0,010 мкг.

Нижний предел измерения концентрации офлоксацина в воздухе 0,25 мг/м³ (при отборе 200 дм³ воздуха).

Определению не мешают сопутствующие вещества (целлюлоза микрокристаллическая, титана диоксид, поливинилпирролидон низкомолекулярный, магний стеариново-кислый, оксипропилцеллюлоза).

5. Средства измерений, вспомогательные устройства, материалы, реактивы

5.1. Средства измерений, вспомогательные устройства, материалы

Хроматограф жидкостный микроколоночный «Милихром» со спектрофотометрическим детектором
Хроматографическая колонка стальная КАХ-44-3, 50´2 мм, заполненная сорбентом Сепарон С18, фракция 5 мкм
Пробоотборное устройство ПУ-3Э	ТУ 4215-000-11696625-95
Весы аналитические ВЛА-200	ГОСТ 24104-88Е
Фильтродержатель	ТУ 95.72.05-77
Устройство для фильтрации жидкостей НПФ «Биохром»
Колбы мерные, вместимостью 500, 50 и 25 см3	ГОСТ 1770-74Е
Пипетки, вместимостью от 1, 2, 5 и 10 см3	ГОСТ 29227-91
Цилиндр мерный со шлифом, вместимостью 100 см3	ТУ 25.11.900-73
Бюксы 50/30	ГОСТ 25336-82Е
Пробирки с пришлифованными пробками, вместимостью 10 см3	ГОСТ 25336-82Е
Фильтры АФА-ВП-10	ТУ 95-743-80
Фильтры «Владипор» типа ММФК-1Г	ТУ 6-05-221-433-79

5.2. Реактивы

Офлоксацин, содержание основного вещества не менее 98,5 %	ВФС 42-3556-99
Ацетонитрил для жидкостной хроматографии	ТУ 6-09-14-2167-84
Калий дигидрофосфат, хч	ГОСТ 4198-75
ортофосфорная кислота, хч	ГОСТ 6552-58
Вода дистиллированная	ГОСТ 6709-72

Допускается применение иных средств измерения, вспомогательных устройств, реактивов и материалов, обеспечивающих показатели точности, установленные для данных методических указаний.

6. Требования безопасности

6.1. При работе с реактивами соблюдают требования безопасности, установленные для работы с токсичными, едкими и легковоспламеняющимися веществами по ГОСТ 12.1.005-88.

6.2. При проведении анализов горючих и вредных веществ соблюдают меры противопожарной безопасности по ГОСТ 12.1.004-76.

6.3. При выполнении измерений с использованием хроматографа соблюдают правила электробезопасности в соответствии с ГОСТ 12.1.019-79 и инструкцией по эксплуатации прибора.

7. Требования к квалификации оператора

К выполнению измерений и обработке результатов допускаются лица с высшим и средним специальным образованием, имеющие навыки работы на жидкостном хроматографе.

8. Условия измерений

8.1. Приготовление растворов и подготовку проб к анализу проводят в нормальных условиях при температуре воздуха (20 ± 5) °С, атмосферном давлении 84 - 106 кПа и влажности воздуха не более 80 %.

8.2. Измерения на жидкостном хроматографе проводят в условиях, рекомендованных технической документацией к прибору.

9. Подготовка к выполнению измерения

9.1. Приготовление растворов

9.1.1. Стандартный раствор № 1 офлоксацина в растворе элюента концентрацией 500 мкг/см³ готовится растворением 25 мг вещества в мерной колбе вместимостью 50 см³.

9.1.2. Стандартный раствор № 2 офлоксацина в растворе элюента концентрацией 100 мкг/см³ готовится разбавлением стандартного раствора № 1. Растворы устойчивы в течение месяца при хранении в холодильнике.

9.1.3. Раствор дигидрофосфата калия концентрацией 0,02 М готовят растворением 1,36 г указанной соли в 500 см³ дистиллированной воды в колбе данного объема.

9.1.4. Раствор элюента готовят смешиванием в мерном цилиндре 90 см³ 0,02 М раствора дигидрофосфата калия и 10 см³ ацетонитрила. Раствор доводят до рН 3 ортофосфорной кислотой. Непосредственно перед измерением раствор фильтруют с помощью устройства для фильтрации и фильтров «Владипор» и дегазируют под вакуумом.

9.2. Подготовка прибора

Общую подготовку прибора осуществляют согласно инструкции по эксплуатации.

9.3. Установление градуировочной характеристики

Градуировочную характеристику, выражающую зависимость величины хроматографического сигнала от массы анализируемого вещества в хроматографируемом объеме раствора, устанавливают по методу абсолютной калибровки с использованием серии градуировочных растворов, которые готовят разбавлением стандартного раствора № 2 согласно табл. 1. Растворы устойчивы в течение двух недель при хранении в холодильнике.

Условия хроматографирования градуировочных смесей и анализируемых проб:

состав элюента: ацетонитрил-0,02М раствор дигидрофосфата калия 1:9, рН 3;

скорость потока элюента 100 мм³/мин;

объем вводимой пробы 2 мм³;

длина волны спектрофотометрического детектора 286 нм;

время удерживания офлоксацина 5 мин.

Таблица 1

Растворы для установления градуировочной характеристики при определении офлоксацина

Растворы помещают в пробоотборное устройство хроматографа.

На полученной хроматограмме измеряют площади пиков с помощью интегратора хроматографа (в условных единицах) при анализе 6 растворов разных концентраций и растворителя, проводя не менее 5 параллельных определений для каждого раствора, и строят градуировочную кривую зависимости площади пика от количества компонента в хроматографируемом объеме раствора (мкг). Проверку градуировочного графика проводят при изменении условий анализа, но не реже 1 раза в месяц.

9.4. Отбор пробы воздуха

Воздух с объемным расходом 20 дм³/мин аспирируют через фильтр АФА ВП-10. Для измерения ¹/₂ ПДК офлоксацина достаточно отобрать 200 дм³ воздуха. Пробы можно хранить в течение трех суток.

10. Выполнение измерения

Фильтр с отобранной пробой помещают в бюкс с пришлифованной крышкой и приливают пипеткой 5 см³ раствора элюента. Периодически встряхивая, выдерживают раствор в течение 5 мин и сливают его в пробирку. Аналогичным образом проводят повторную экстракцию с фильтра и объединяют растворы. Степень экстракции с фильтра 92 %. Хроматографирование раствора пробы проводят в тех же условиях, что и хроматографирование градуировочных растворов. Количественное определение содержания анализируемого вещества в растворе проводят по предварительно построенному градуировочному графику.

11. Расчет концентрации

Концентрацию офлоксацина (С, мг/м³) в воздухе вычисляют по формуле:

 где

а - содержание вещества в анализируемом объеме пробы, найденное по градуировочному графику, мкг;

б - объем пробы, взятый для хроматографирования, см³;

в - общий объем раствора пробы, см³;

V - объем воздуха, отобранного для анализа и приведенного к стандартным условиям, дм³ (см. прилож. 1).

12. Оформление результатов анализа

Результат количественного анализа представляют в виде (С ± D) мг/м³, Р = 0,95, где D - характеристика погрешности, D = 0,16С + 0,02.

13. Контроль погрешности методики

Значения характеристики погрешности, норматива оперативного контроля точности и норматива оперативного контроля воспроизводимости приведены в табл. 2 в виде зависимости от значения массовой концентрации анализируемого компонента в пробе С.

Таблица 2

Результаты метрологической аттестации методики количественного химического анализа офлоксацина

13.1. Оперативный контроль воспроизводимости

Оперативный контроль воспроизводимости выполняют в одной серии с анализом рабочих проб. Отбирают реальные пробы воздуха рабочей зоны из одного традиционного места отбора двумя пробоотборниками одновременно. Анализируют в соответствии с прописью методики, максимально варьируя условия проведения анализа: партии реактивов, наборы мерной посуды и т.д., и получают два результата С₁ и С₂ анализов. Результаты анализа не должны отличаться друг от друга на величину большую, чем норматив оперативного контроля воспроизводимости D:

При превышении расхождения между двумя результатами норматива оперативного контроля воспроизводимости эксперимент повторяют. При повторном превышении указанного норматива выясняют причины, приводящие к неудовлетворительным результатам, и устраняют их. Внутренний оперативный контроль воспроизводимости проводят не реже, чем 1 раз в неделю.

13.2. Оперативный контроль точности

Оперативный контроль точности выполняют в одной серии с анализом рабочих проб. Отбирают реальные пробы воздуха рабочей зоны из одного традиционного места отбора двумя пробоотборниками одновременно. Затем к одной пробе, отобранной на фильтр, делают добавку анализируемого компонента δС из раствора, нанося его на фильтр. Величина добавки должна соответствовать 50 - 150 % от содержания компонента в пробе. Результаты анализа С₁ без добавки и С₂ с добавкой получают по возможности в одинаковых условиях: одним аналитиком, с одной партией реактивов, с одним набором посуды и т.д. Погрешность процедуры отбора проб контролируют путем поверки используемых пробоотборников. Расчет норматива оперативного контроля погрешности К проводят по характеристике погрешности методики за вычетом характеристики погрешности пробоотборника. Решение об удовлетворительной погрешности принимают при выполнении условия:

14. Нормы затрат времени на анализ

Для проведения серии анализов из 6 проб при последовательном отборе проб воздуха требуется 4 ч.

Методические указания разработаны Российским государственным медицинским университетом (Е.Б. Гугля).

Приложение 1

Приведение объема воздуха к стандартным условиям

Приведение объема воздуха к стандартным условиям (температура 20 °С и давление 101,33 кПа) проводят по формуле:

, где

V_t - объем воздуха, отобранного для анализа, дм³;

Р - барометрическое давление, кПа (101,33 кПа = 760 мм рт. ст.);

t - температура воздуха в месте отбора пробы, °С.

Для удобства расчета V₂₀ следует пользоваться таблицей коэффициентов (прилож. 2). Для приведения воздуха к стандартным условиям надо умножить V_t на соответствующий коэффициент.

Приложение 2

Коэффициенты для приведения объема воздуха к стандартным условиям

Приложение 3

Указатель основных синонимов, технических, торговых и фирменных названий веществ

1. Амиодарон

2. Амоксициллина тригидрат

3. Ацикловир

4. Витамин А

5. Галоперидол

6. Ксиланаза

7. Лоперамида гидрохлорид

8. Мексидол

9. Мексикор

10. Офлоксацин

11. Пиразинамид

12. Ретинола ацетат

13. Родопол-23

14. Симвастатин

15. Трамадол

16. Хладон-23

17. Хладон-31-10

18. Хладон-116

19. Хладон-122

20. Хладон-R11511

21. Цианборгидрид натрия

22. Этамбутола дигидрохлорид

Приложение 4

Вещества, определяемые по ранее утвержденным методическим указаниям

 

СОДЕРЖАНИЕ