Государственное санитарно-эпидемиологическое нормирование
Российской Федерации

4.1. МЕТОДЫ КОНТРОЛЯ. ХИМИЧЕСКИЕ ФАКТОРЫ

ОПРЕДЕЛЕНИЕ ОСТАТОЧНЫХ
КОЛИЧЕСТВ ПЕСТИЦИДОВ
В ПИЩЕВЫХ ПРОДУКТАХ,
СЕЛЬСКОХОЗЯЙСТВЕННОМ СЫРЬЕ
И ОБЪЕКТАХ ОКРУЖАЮЩЕЙ СРЕДЫ

Сборник методических указаний

МУК 4.1.1941 - 4.1.1954-05

Москва, 2009

1. Сборник подготовлен Федеральным научным центром гигиены им. Ф.Ф. Эрисмана (академик РАМН, проф. В.Н. Ракитский, проф. Т.В. Юдина); при участии специалистов Федеральной службы по надзору в сфере защиты прав потребителей и благополучия человека. Разработчики методов указаны в каждом из них.

2. Рекомендованы к утверждению Комиссией по государственному санитарно-эпидемическому нормированию при Федеральной службе по надзору в сфере защиты прав потребителей и благополучия человека.

3. Утверждены Главным государственным санитарным врачом Российской Федерации, Первым заместителем Министра здравоохранения Российской Федерации, академиком РАМН Г.Г. Онищенко.

4. Введены впервые.

УТВЕРЖДАЮ

Главный государственный санитарный врач

Российской Федерации,

Руководитель Федеральной службы

по надзору в сфере защиты прав потребителей и

благополучия человека

____________________ Г.Г. Онищенко

18 января 2005 г.

МУК 4.1.1943-05

Дата введения 18.04.05

МЕТОДИЧЕСКИЕ УКАЗАНИЯ
ПО ОПРЕДЕЛЕНИЮ ОСТАТОЧНЫХ КОЛИЧЕСТВ
ДЕЛЬТАМЕТРИНА В ЗЕЛЁНОЙ МАССЕ,
СЕМЕНАХ И МАСЛЕ РАПСА
ГАЗОХРОМАТОГРАФИЧЕСКИМ МЕТОДОМ

1. ВВОДНАЯ ЧАСТЬ

Фирма производитель: Байер Кроп Сайенс (Германия)

Торговое название: ДЕЦИС

Действующее вещество: дельтаметрин

(S)-α-циано-3-феноксибензил (1R, 3R)-3-(2,2-дибромвинил)-2,2-диметилциклопропанкарбоксилат (ИЮПАК)

[1 R-[1-α (S*),3-α]]-циано(3феноксифенил)метил 3-(2,2дибромэтенил)-2,2-диметилциклопропанкарбоксилат (С.А.)

Эмпирическая формула: С₂₂Н₁₉br₂NО₃

Молекулярная масса: 505,2

Бесцветное кристаллическое вещество

Температура плавления: 100 - 102 °С

Давление паров при 25 °С: 1,24 ´ 10^-5 мПа

Коэффициент распределения н-октанол/вода: K_ow log P = 4,6

Растворимость (г/л) при 20 °С: диоксан - 900, циклогексан - 750, дихлорметан - 700, ацетон - 500, этанол - 15, вода (при 25 °С) < 0,2 мкг/л.

Стабильно при хранении на воздухе. Более стабильно в кислой, чем в щелочной среде (DT₅₀ = 2,5 дня при рН 9)

В биологически активных почвах в аэробных условиях дельтаметрин подвергается микробиологическому разложению в течение 1 - 2 недель.

Краткая токсикологическая характеристика

Острая пероральная токсичность (LD₅₀) для крыс - 128 - 138 мг/кг; острая дермальная токсичность (LD₅₀) для крыс - более 2000 мг/кг; острая ингаляционная токсичность (LC₅₀) для крыс - 2,2 мг/л воздуха.

Дельтаметрин вызывает умеренное раздражение глаз кролика и не влияет на кожу. Вещество токсично для рыб (LC₅₀ = 0,9 - 1,4 мкг/л) и пчел (LD₅₀ = 50 - 80 нг/особь).

Гигиенические нормативы для дельтаметрина в России: ПДК в почве - 0,01 мг/кг; ПДК в воде водоемов - 0,006 мг/дм³; МДУ в подсолнечнике (семена), дыне, табаке - 0,1; подсолнечнике (масло), персиках, бананах - 0,05; зерне хлебных злаков, зернобобовых, яблоках, грушах, капусте, кукурузе, огурцах, салате, рисе, цитрусовых (мякоть) - 0,01; винограде, картофеле, свекле сахарной, томатах, арбузе, сое (масло), перцах, какао бобах - 0,01 (мг/кг).

Область применения препарата

Дельтаметрин - инсектицид контактного и кишечного действия из группы синтетических пиретроидов. Он эффективно подавляет развитие вредителей из отрядов жесткокрылых, перепончатокрылых, прямокрылых, двукрылых и чешуекрылых (имаго и личинки) в посевах зерновых и овощных культур, кукурузы, хлопчатника, на плантациях картофеля, технических и плодовых культур при норме расхода 5 - 25 г д.в./га.

Зарегистрирован в России под торговыми названиями Децис, КЭ (25 г/л), Децис Экстра, КЭ (125 г/л) и Децис Профи, ВДГ (250 г/кг) в качестве инсектицида для применения в посевах пшеницы, ячменя, кукурузы, пастбищных трав, в посадках капусты и картофеля, на плодовых культурах путем опрыскивания вегетирующих растений. Препараты проходят регистрационные испытания в посевах рапса.

2. МЕТОДИКА ОПРЕДЕЛЕНИЯ ОСТАТОЧНЫХ КОЛИЧЕСТВ ДЕЛЬТАМЕТРИНА В ЗЕЛЁНОЙ МАССЕ, СЕМЕНАХ И МАСЛЕ РАПСА ГАЗОХРОМАТОГРАФИЧЕСКИМ МЕТОДОМ

2.1 Основные положения

2.1.1 Принцип метода

Метод основан на газохроматографическом определении дельтаметрина с ЭЗД на неподвижной фазе SE-30 после экстракции его из зелёной массы рапса водным ацетоном, из семян ацетонитрилом, а из масла водным ацетонитрилом, очистки экстракта перераспределением в системе несмешивающихся растворителей, а также на колонке с силикагелем и концентрирующем патроне Диапак-диол.

Количественное определение проводится методом абсолютной калибровки.

2.1.2 Избирательность метода

В предлагаемых условиях метод специфичен в присутствии пестицидов, применяемых в интенсивной технологии выращивания рапса.

2.1.3 Метрологическая характеристика метода

Таблица

Метрологическая характеристика метода

Анализируемый объект	Метрологические параметры, Р = 0,95, n = 20
Анализируемый объект	Предел обнаружения, мг/кг	Диапазон определяемых концентраций, мг/кг	Среднее значение определения, %	Стандартное отклонение, S, %	Относительное отклонение DS, %	Доверительный интервал среднего, %
Зеленая масса	0,01	0,01 - 0,1	83,9	3,5	1,0	±3,3
Семена	0,01	0,01 - 0,1	83,4	4,4	1,0	±4,0
Масло	0,01	0,01 - 0,1	81,8	3,0	1,3	±2,8

2.2 Реактивы, растворители и материалы

Дельтаметрин, аналитический стандарт фирмы Авентис (Германия) с содержанием д.в. 99,6 %

Ацетон, чда, ГОСТ 2603-79

Ацетонитрил, ч., ТУ 6-09-3534-82

Вода бидистиллированная, ГОСТ 7602-72

Гексан, ч., ТУ 6-09-3375-78

Калия перманганат, ГОСТ 20490-75

Кальция хлорид, хч., ГОСТ 4161-77

Калий углекислый, хч., ГОСТ 4221-76

Кислота серная, хч., ГОСТ 4204-77

Натрий двууглекислый, ГОСТ 83-79

Натрия гидроксид, хч., ГОСТ 4328-77

Натрия сульфат безводный, хч., ГОСТ 4166-76

Фосфора пентоксид, ч., МРТУ 6-09-5759-69

Этилацетат, ГОСТ 22300-76

Элюент для колоночной хроматографии: смесь гексан-этилацетат (9:1, по объему)

Силикагель для адсорбционной хроматографии (Вельм, Германия) I степени активности или силикагель КСК (60 - 100 меш)

Концентрирующий патрон Диапак-диол (ЗАО БиоХимМак, РФ)

Азот газообразный, осч, ГОСТ 9293-74

Стекловата

Фильтры бумажные, синяя лента, ТУ 6-09-1678

Целит 535 (2 - 15 мкм) /Серва, Германия/ или аналогичный

2.3 Приборы, аппаратура, посуда

Хроматограф газовый «Кристалл 2000М» с ЭЗД или другой аналогичного типа

Колонка хроматографическая, стеклянная, 1000´3 мм, неподвижная фаза - 3 % SE-30 на Хромосорбе W/HP (0,12 - 0,15 мм)

Колонка капиллярная кварцевая ZB-1, длина 30 м, внутренний диаметр 0,32 мм, толщина плёнки 0,5 мкм, неподвижная фаза SE-30, фирма Phenomenex (США) или аналогичная

Микрошприц ёмкостью 10 мкл МШ-10Ф по ТУ 64-1-2850

Аппарат для встряхивания АВУ, ТУ 64-1-1081-83

Весы аналитические типа ВЛР-200, ГОСТ 19401-74

Водоструйный насос, ГОСТ 10696-75

Мельница электрическая лабораторная, ТУ 46-22-236-79 или аналогичная

Прибор для перегонки при атмосферном давлении

Ротационный испаритель тип ИР-1м, ТУ 25-11-917-76

Баня водяная, ТУ 46-22-603-75

Воронка Бюхнера, ГОСТ 0147-73

Воронки делительные вместимостью 100 и 250 мл, ГОСТ 25336-82

Воронки для фильтрования, стеклянные, ГОСТ 8613-75

Колба Бунзена, ГОСТ 5614-75

Колбы круглодонные на шлифе вместимостью 100 и 250 мл, ГОСТ 9737-70

Колбы конические с притертыми пробками вместимостью 250 мл, ГОСТ 25336-82

Колбы мерные вместимостью 50, 100 мл, ГОСТ 1770-74

Колбы грушевидные вместимостью 50 и 100 мл, ГОСТ 25336-82

Пипетки мерные вместимостью 1, 2, 5 и 10 мл, ГОСТ 20292-74Е

Пробирки градуированные с притертыми пробками вместимостью 5 и 10 мл, ГОСТ 10515-75

Цилиндры мерные вместимостью 50, 100, 250 и 500 мл, ГОСТ 1770-74

2.4 Отбор проб

Отбор проб производится в соответствии с «Унифицированными правилами отбора проб сельскохозяйственной продукции, продуктов питания и объектов окружающей среды для определения микроколичеств пестицидов» (№ 2051-79 от 21.08.79 г.).

Отобранные пробы зеленой массы хранят в стеклянной таре в холодильнике не более суток. Для длительного хранения пробы замораживают и хранят в морозильной камере при температуре -18 °С до анализа. Семена и масло рапса хранят в стеклянной таре в холодильнике. Перед анализом семена размалывают на лабораторной мельнице, а зелёную массу измельчают.

2.5 Подготовка к определению

2.5.1 Подготовка и очистка реактивов и растворителей

Органические растворители перед началом работы очищают, сушат и перегоняют в соответствии с типовыми методиками. Гексан встряхивают с небольшими порциями концентрированной серной кислоты до тех пор, пока свежая порция кислоты не перестанет окрашиваться. Затем гексан последовательно промывают водой, 2 %-ным раствором гидроксида натрия и снова водой, после чего его сушат над гидроксидом натрия и перегоняют.

Ацетон перегоняют над перманганатом калия и поташом (на 1 л ацетона 10 г KМnО₄ и 2 г К₂СО₃).

Ацетонитрил сушат над пентоксидом фосфора и перегоняют; отогнанный растворитель повторно перегоняют над углекислым калием.

Этилацетат промывают равным объемом 5 %-ного раствора двууглекислого натрия, сушат над хлористым кальцием и перегоняют.

2.5.2 Подготовка и кондиционирование колонки

Готовую насадку (3 % SE-30 на Хромосорбе W/HP) засыпают в стеклянную колонку, уплотняют под вакуумом, колонку устанавливают в термостате хроматографа, не подсоединяя к детектору, и стабилизируют в токе азота при температуре 270 °С в течение 8 - 10 часов.

2.5.3 Приготовление стандартных растворов

Основной стандартный раствор дельтаметрина с содержанием 100 мкг/мл готовят растворением 0,010 г препарата, содержащего 99,6 % д.в., в гексане в мерной колбе ёмкостью 100 мл. Рабочие стандартные растворы с концентрациями 0,01, 0,02, 0,05 и 0,1 мкг/мл готовят из основного стандартного раствора дельтаметрина соответствующим последовательным разбавлением гексаном. Все растворы хранят в холодильнике не более одного месяца.

2.5.4 Построение калибровочного графика

Для построения калибровочного графика в инжектор хроматографа вводят по 2 мкл рабочего стандартного раствора дельтаметрина с концентрацией 0,01, 0,02, 0,05 и 0,1 мкг/мл. Осуществляют не менее 5 параллельных измерений и находят среднее значение площади хроматографического пика для каждой концентрации. Строят калибровочный график зависимости площади хроматографического пика в S мВ · с от концентрации дельтаметрина в растворе в мкг/мл.

2.5.5 Подготовка колонки с силикагелем и концентрирующего патрона Диапак-диол для очистки экстракта

В нижнюю часть стеклянной колонки длиной 25 см и внутренним диаметром 1,8 см вставляют тампон из стекловаты, закрывают кран и приливают около 10 мл гексана. Затем в колонку вносят суспензию 5 г силикагеля в 20 мл гексана. Дают растворителю стечь до верхнего края сорбента и помещают на него слой безводного сульфата натрия высотой 1 см. Колонку промывают 30 мл смеси гексан - этилацетат (9:1, по объему) и 20 мл гексана со скоростью 1 - 2 капли в секунду, после чего она готова к работе.

Концентрирующий патрон Диапак-диол промывают последовательно с помощью медицинского шприца 20 мл смеси гексан - этилацетат (9:1, по объёму) и 10 мл гексана со скоростью 5 мл/мин.

2.5.6 Проверка хроматографического поведения дельтаметрина на колонке с силикагелем

В круглодонную колбу емкостью 10 мл отбирают 0,1 мл стандартного раствора дельтаметрина с концентрацией 10 мкг/мл. Отдувают растворитель током теплого воздуха, остаток растворяют в 3 мл гексана и наносят на колонку. Промывают колонку 50 мл гексана, затем 30 мл смеси гексан-этилацетат, 9:1 со скоростью 1 - 2 капли в секунду. Отбирают фракции по 5 мл каждая, упаривают, остаток растворяют в 2 мл гексана и анализируют на содержание дельтаметрина по п. 2.7.1.

Фракции, содержащие дельтаметрин, объединяют, упаривают досуха, остаток растворяют в 4 мл гексана и вновь анализируют по п. 2.7.1. Рассчитывают содержание дельтаметрина в элюате, определяют полноту вымывания вещества из колонки и необходимый для очистки экстракта объем элюента.

ПРИМЕЧАНИЕ: Профиль вымывания дельтаметрина может меняться при использовании новой партии сорбента и растворителей.

2.5.7 Проверка хроматографического поведения дельтаметрина на концентрирующем патроне Диапак-диол

В круглодонную колбу емкостью 10 мл отбирают 0,1 мл стандартного раствора дельтаметрина с концентрацией 10 мкг/мл. Отдувают растворитель током теплого воздуха, остаток растворяют в 2 мл гексана и наносят на патрон. Промывают патрон 7 мл гексана, собирают фракции по 1 мл и анализируют на содержание дельтаметрина по п. 2.7.1.

Фракции, содержащие дельтаметрин, объединяют, упаривают досуха, остаток растворяют в 4 мл гексана и вновь анализируют по п. 2.7.1. Рассчитывают содержание дельтаметрина в элюате, определяют полноту вымывания вещества из патрона и необходимый для очистки экстракта объем элюента.

ПРИМЕЧАНИЕ: Профиль вымывания дельтаметрина может меняться при использовании новой партии концентрирующих патронов Диапак-диол и растворителей.

2.6 Описание определения

2.6.1 Экстракция дельтаметрина

2.6.1.1 Зелёная масса. К навеске (10 г) измельчённого растительного материала добавляют 100 мл 70 %-ного водного ацетона и перемешивают в течение 1 часа на аппарате для встряхивания. Добавляют 2 г целита и фильтруют под вакуумом на воронке Бюхнера через бумажный фильтр в колбу емкостью 250 мл. Растительный материал повторно экстрагируют 50 мл 70 %-ного водного ацетона при встряхивании в течение 20 мин и фильтруют. Из объединенного водно-ацетонового экстракта отбирают аликвоту раствора, эквивалентную 5 г растительного материала. Дальнейшую очистку экстракта проводят по пп. 2.6.2.1 и 2.6.3.

2.6.1.2 Семена. К навеске (10 г) размолотых семян приливают 50 мл ацетонитрила, суспензию перемешивают в течение 40 минут на аппарате для встряхивания и фильтруют под вакуумом на воронке Бюхнера через бумажный фильтр в колбу ёмкостью 250 мл. Растительный остаток повторно экстрагируют 30 мл ацетонитрила при встряхивании в течение 20 минут и суспензию фильтруют. Из объединенного ацетонитрильного экстракта отбирают аликвоту раствора, эквивалентную 2 г семян. Дальнейшую очистку экстракта проводят по пп. 2.6.2.2, 2.6.3 и 2.6.4.

2.6.1.3 Масло. Навеску (2 г) масла помещают в коническую колбу емкостью 100 мл, приливают 50 мл 80 %-ного водного ацетонитрила и эмульсию энергично перемешивают в течение 1 часа на аппарате для встряхивания. Эмульсию центрифугируют 5 мин при 6000 g и отделяют водно-ацетонитрильную фазу. Масло повторно экстрагируют 20 мл 80 %-ного водного ацетонитрила и отделяют водно-ацетонитрильную фазу центрифугированием. Объединенный ацетонитрильный экстракт подвергают дальнейшей очистке по пп. 2.6.2.3, 2.6.3 и 2.6.4.

2.6.2 Очистка переэкстракцией

2.6.2.1 Зеленая масса. Аликвоту водно-ацетонового экстракта из п. 2.6.1.1 переносят в делительную воронку вместимостью 250 мл, приливают 30 мл гексана и смесь встряхивают в течение 1 мин. Собирают гексановую фракцию. Экстракцию гексаном повторяют ещё два раза (по 30 мл). Объединённый гексановый экстракт пропускают через слой безводного сульфата натрия и упаривают досуха на роторном испарителе при температуре 40 °С.

2.6.2.2 Семена. Объем аликвоты экстракта из п. 2.6.1.2 довозят ацетонитрилом до 30 мл. Раствор переносят в делительную воронку емкостью 100 мл, приливают 10 мл гексана и содержимое встряхивают в течение 1 минуты. После разделения слоев гексановую фазу отбрасывают, а ацетонитрильную фазу фильтруют через бумажный фильтр и упаривают досуха на роторном испарителе при температуре 40 °С.

2.6.2.3 Масло. Водно-ацетонитрильный экстракт из п. 2.6.1.3 упаривают до водного остатка и переносят последний в делительную воронку ёмкостью 100 мл. Приливают 20 мл гексана и смесь встряхивают в течение 1 минуты. После её расслоения гексановый слой отбрасывают, к водной фазе добавляют 10 мл ацетона и дельтаметрин экстрагируют гексаном при встряхивании трижды (30 + 30 + 20 мл). Объединённый гексановый экстракт пропускают через слой безводного сульфата натрия и упаривают досуха на роторном испарителе при температуре 40 °С.

2.6.3 Очистка на колонке с силикагелем

Сухой остаток зелёной массы, семян или масла (из пп. 2.6.2.1 - 2.6.2.3) количественно переносят тремя 1 мл порциями гексана в подготовленную хроматографическую колонку (п. 2.5.5). Промывают колонку 50 мл гексана, которые отбрасывают. Дельтаметрин элюируют 30 мл смеси гексан-этилацетат (9:1, по объему) в грушевидную колбу емкостью 100 мл. Раствор упаривают досуха на роторном испарителе при температуре 40 °С. Сухой остаток экстракта зелёной массы растворяют в 5 мл гексана и анализируют по п. 2.7.1.

Экстракты семян и масла подвергают дополнительной очистке на концентрирующем патроне Диапак-диол.

2.6.4 Очистка на концентрирующем патроне Диапак-диол

Сухой остаток экстракта семян или масла из п. 2.6.3 переносят двумя 1 мл порциями гексана в подготовленный концентрирующий патрон (п. 2.5.5). Дельтаметрин элюируют 7 мл гексана, отбрасывая 1 мл и собирая последующие 6 мл в грушевидную колбу емкостью 10 мл. Раствор упаривают досуха на роторном испарителе при температуре 40 °С. Сухой остаток растворяют в 2 мл гексана и анализируют по п. 2.7.1.

2.7 Условия хроматографирования

2.7.1. Метод ГЖХ с насадочной колонкой

Газовый хроматограф «Кристалл 2000 М» с электронозахватным детектором с пределом детектирования по линдану не выше 8,2 ´ 10^-15 г/см³

Колонка хроматографическая, стеклянная, 1000´3 мм, неподвижная фаза - 3 % SE-30 на Хромосорбе W/HP (0,12 - 0,15 мм)

Температура испарителя - 270 °С, термостата колонки - 245 °С, детектора - 330 °С

Скорость потока газа-носителя (азот) - 50 мл/мин

Объем вводимой пробы - 2 мкл

Время удерживания дельтаметрина - 3 мин.

Предел детектирования - 0,02 нг

Линейный диапазон детектирования: 0,02 - 0,2 нг

Каждую анализируемую пробу вводят в хроматограф 3 раза и вычисляют среднюю площадь пика

Образцы, дающие пики большие, чем стандартный раствор с концентрацией 0,1 мкг/мл, разбавляют гексаном.

2.7.2. Метод ГЖХ с капиллярными колонками

Газовый хроматограф «Кристалл 2000 М» с электронозахватным детектором с пределом детектирования по линдану не выше 8,2 ´ 10^-¹⁵ г/см³

Колонка капиллярная кварцевая ZB-1, 30 м ´ 0,32 мм ´ 0,5 мкм

Температура испарителя - 270 °С, термостата колонки - 265 °С, детектора - 320 °С

Газовый режим: газ-носитель - азот, расход - 3,0 мл/мин; газ для поддува в детектор - азот, расход - 20 мл/мин

Деление потока: 1:3,3

Объем вводимой пробы - 1 мкл

Время удерживания дельтаметрина - 14,24 мин.

Предел детектирования - 0,02 нг

Линейный диапазон детектирования: 0,02 - 0,2 нг

2.8 Обработка результатов анализа

Содержание дельтаметрина рассчитывают методом абсолютной калибровки по формуле:

где

X - содержание дельтаметрина в пробе, мг/кг;

H₁ - площадь пика образца, мВ · с;

Н₀ - площадь пика стандарта, мВ · с;

А - концентрация стандартного раствора дельтаметрина, мкг/мл;

V - объем экстракта, подготовленного для хроматографирования, мл;

m - масса анализируемой части образца (г) /для зелёной массы - 5 г, для семян и масла - 2 г/.

3. ТРЕБОВАНИЯ ТЕХНИКИ БЕЗОПАСНОСТИ

Необходимо соблюдать общепринятые правила безопасности при работе с органическими растворителями, токсичными веществами, электронагревательными приборами.

4. КОНТРОЛЬ ПОГРЕШНОСТИ ИЗМЕРЕНИЙ

Оперативный контроль погрешности и воспроизводимости измерений осуществляется в соответствии с рекомендациями МИ 2335-95. ГСИ. Внутренний контроль качества результатов количественного химического анализа.